基于红细胞纳米金胶细胞生物传感器的构建.pdfVIP

基于“红细胞，纳米金胶，，细胞生物传感器的构建 题澄麈?1，鲁双云1，姜启玉1，于春梅1，李根喜2，陈洪渊3 (1南通大学公共卫生学院，南通，226001：2南京大学生物化学系，南京， 210093；3南京大学化学生物学研究所，南京，210093) 众所周知纳米金胶能提供一种类似于氧化还原蛋白质自身所处的环境，使吸附在其 表面的蛋白质保持它们的生物活性的同时，被吸附的蛋白质又能使金胶保持稳定【1．2】。 有文献【3】报道了半胱胺、含氨基或含硫基的硅氧烷在掺锡的氧化铟和金电极表面上能构 建金膜。该金膜有良好的稳定性，可进一步通过在金胶表面固定酶或蛋自质构建各种生 物传感器和生物电子装置f4，5】。我们曾报道了【6-12】纳米金胶粒子的吸附特性，以及基 于固定在金胶表面上的血红蛋I刍(I-／b)、肝细胞构建的生物传感器和细胞生物传感器。本 文将含有Hb的红细胞(RBC)成动地组装在纳米金胶固定的乙二胺修饰的化学预处理玻碳 电极表面，构建对一氧化氮科0)有良好响应的细胞生物传感器。 依据我们以前报道【13，14】的方法构建电化学预处理玻碳电极。玻碳电极依次在精砂、 细砂、毛皮上抛光，在水和乙醇中超声清洗后，放入含有0．Imol／L乙二胺和0．Imol／L的 高氯酸的溶液的中进行循环扫描5圈，扫描电位为0．O肚I．40V(20mV／s)。乙二胺在预处 理玻碳电极表面的电化学过程可以明显的观察到。 扫描第一圈时，在0．65和1．10V可以观察到两个氧 化峰，在随后的扫描中可以看到两个氧化峰消失， 氧化电流下降。说明有不导电的物质在电极表面形 成。乙二胺修饰的预处理玻碳电极用双蒸水冲洗， 并浸泡lO个小时去掉物理吸附的乙二胺。随后此电 极分别在4。C金胶溶液中和37。CRBC溶液中浸泡 16小时和10小时。成功构建的RBC／金胶．乙二胺修 ofBRCs 图1．SEMimage 饰的预处理玻碳电极，置于口H7．2PBS中，40c存 assembledOn31narlO‘sized 放备用。 gold 通过研究在不同纳米尺寸(16，24，31，42和 粒子或团簇表面可以通过扫描电子显微镜进行表征(见图1)。图2和图3为RBC／金胶修 7．2PBS循环伏安圈，可发现一对准可逆的还乐峰，还原峰和氧化峰电位分 饰电极在pH 别在-0．040和O．180V，条件电极电位是0．070V，比lib／金胶．半胱胺修饰电极更负。根 据公式【15]：i．：型里∑，得到n为1．1，因此RBC在金胶，乙二胺修饰的预处理玻碳电极 ’4RT 上的还原是单电子转移反应过程。峰电流与扫描速度在lo一250mV／s成线性关系。表明 这是一个表面吸附过程。随着加入NO量的增加，阴极蜂电流增加，而阳极峰电流消失， 一个典型的电催化过程。 通过对NO的安培电流一时问曲线的研究，可知反应的线性范围比Hb／金胶一半胱胺修 饰的金电极窄。线性回归方程为i／¨A=O．161+1．27x106CNO／IVl，相关系数(Y)为0．9986， 100 检测线低达5．0x104mol／L(S／N=3)。电极响应时间8秒，比血红蛋白，金胶一半胱胺修饰的 NO，其相对标准偏差(RSD)为4．2％a 金电极反应时间长。8次连续测定2．0x10Zmol／L ‘{zt8 №ntid，Ww．S(日 R2CVJof●BRC}goMCOlloid·柚yknediad睁脚m6耐R明． CVs of ^ BRO、gold 7．2PB$m Ps the№mofNO pH mtapH7．2 atⅧⅢof50mV／