对虾白斑综合症病毒核衣壳蛋白wsv220的研究鉴定.pdf

覆毽曩n 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19_23 对虾白斑综合症病毒核衣壳蛋白wsv220的研究鉴定+ 吴成林‘，杨丰‘ (国家海洋局第三海洋研究所，福建厦门361005) 摘要：结合SDS．PAGE电泳和质谱分析，发现了一分子量为79kDa的蛋白，它是对虾白斑综 合症病毒基因ORF coli blot实验 XLl．Blue为宿主菌，成功表达并纯化了GST融合的目的蛋白并制做抗体。Western 中蛋白特异抗体只与完整的病毒和核衣壳裂解蛋白中的WSV220反应，而不和膜蛋白反应， 证明wsv220所编码的蛋白在完整病毒颗粒上定位于核衣壳。免疫电镜定位中以金颗粒只特 异的标记在核衣壳表面上，不存在于完整病毒表面上。 blot；免疫电镜定位；核衣壳蛋白 关键词：对虾白斑综合症病毒；wsv220基因；Western 对虾白斑综合症病毒(white virus，wssv)是对虾的最主要病毒病原之 spotsyndrome 一f1．2】。该病毒的宿主范围广【3，4，51，传染力强，致死率高，难防治。上世纪90年代初在台湾 出现后，在全世界迅速流传开来，给全球造成巨大经济损失。近年虽无大规模爆发，但是局 部范围发病的消息时有报道，因而成为海水养殖病害的研究重点。对WSSV研究表明，该病 毒是一种新型的外面具包膜无包涵体的双链环状DNA杆状型病毒，基因组全长约300 Committeeon kbl6,7,Sl，被国际病毒分类委员会(International Taxonomy 类为Nimaviridae rehispovlrus[91。目前对该病毒的研究已进入功能基因组时代。 WSSV是至今发现的最大的病毒之一，因为对其感染机制的欠缺，防治该病毒至 今尚无有效的方法，在病毒分子生物学水平进行深入研究很有必要。特别是对WSSV的结 构功能基因flo】的研究是了解病毒感染、装配的重要程序，对最终病毒的防治将起到推动作用。 [1oJ。本实验证明了WSV220蛋白为WSSV核衣壳蛋白。因为缺少对虾细胞系，对病毒蛋白 的分析大多通过先纯化完整病毒，然后结合SDS．PAGE电泳和质谱分析，进行病毒结构蛋白 鉴剧¨，12,¨l。本文对wsv220进行原核表达，纯化融合蛋白表达产物，将其作为抗原对小鼠 进行免疫制做多克隆抗体，利用得到的抗体进行Westernblot实验和免疫电镜定位，了解该 蛋自在完整病毒颗粒上的确切定位。 1材料和方法 1．1材料 L_|和连接酶为 pGEX．2T表达载体为深圳市源动力生物技术开发公司产品。BamHLi、SpP +资助项目：国家“863”资源和环境领域课题(2003AA626020) 作者简介：吴成林(1979．)，男，硕士研究生。 +通讯作者。Email：mbiotech@public．xm．旬．cn 474 禳硅霞n。 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19-23 XLl．Blue为本实验室保存。Ni-NTA TaKaRa公司产品，Taq酶为本实验室制备。菌株E．coli nm金颗粒标记的羊抗鼠 为Qiagen公司产品。完全佐剂和不完全佐剂，NBT／BCIP试剂盒，5 IgG为Sigma公司产品。反转录酶(M-MLVRTase)，碱