小剂量抗CD3单克隆抗体治疗有效逆转新发的I型糖尿病.pdf

生物技术 小剂量抗CD3单克隆抗体治疗有效 逆转新发的I型糖尿病 陈国江韩根成王建安王仁喜徐若男 宋伦沈倍奋黎燕 军事医学科学院基础医学研究所分子免疫研究室，北京，100850 摘要 抗CD3单克隆抗体作为一种免疫抑制剂广泛应用于治疗器官移植后急性排斥反应。 但其应用于其他领域，如自身免疫病的治疗，还研究甚少。本研究以I型糖尿病动物模 型——非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠——为研究对象，验证抗CD3单抗用于治疗新发病的 NOD小鼠的可行性。结果显示，经短期小剂量CD3单抗治疗，到第9周时，75％的小鼠的 血糖恢复至正常。维持时闰超过30周，胰岛形态亦得到了明显改善。CD3单抗的这种效应 并不是由于清除T细胞引起免疫抑制所致，而是诱导产生了胰岛p细胞特异性的免疫耐受。 关键词免疫学；抗CD3单克隆抗体；I型糖尿病；免疫耐受 I型糖尿病是一种细胞免疫为主的自身免疫病，它是由于机体对胰岛B细胞相关自身抗原耐受的缺失 导致胰岛B细胞大量破坏，胰岛素分泌显著减少，患者出现血糖升高，多饮、多食、多尿等症状【l】。研究 表明，T细胞，特别是自身反应性T细胞，在I型糖尿病发生发展过程中具有极为重要的作用【2】。由于遗 传、感染等众多因素，机体对胰岛自身抗原耐受缺失，自身反应性T细胞大量扩增，从而破坏胰岛，最终 导致I型糖尿病的发生。因此通过清除体内自身反应性T细胞或诱导其无能、凋亡，将可能为治疗I型糖 尿病提供新的方法和手段。 目前关于自身免疫病的研究主要集中于通过诱导产生免疫耐受以防止自身免疫病的发生13】。而对己发 病的患者主要采取大剂量的免疫抑制药物冲击疗法，往往在抑制机体免疫的同时，伴有容易感染、肝肾毒 性等副作用。因此有必要寻找一种方法，能有效治疗已发病的自身免疫病。抗人CD3单克隆抗体(OKT3) 作为抗移植排斥药物已广泛应用于临床，并获得了良好的效果f4】。目前国外已有将CD3单抗用于治疗I型 糖尿病的研究报道，表明其具有一定的疗效，但其机理并不清楚【5J。本文探讨CD3单抗治疗I型糖尿病， 观察其疗效并就其机理作初步研究。 1 材料与方法 1．1小鼠和血糖监测 室引进，于本院实验动物中心SPF级饲养。从10周龄开始每周通过割尾取血用微量血糖测定仪 (GLUCOTREND，Roche 1．2仓鼠正常血清IgG制备 黑线仓鼠：雄性，7～8周龄，购自本院实验动物中心。断头取血，分离血清，饱和硫酸铵沉淀、法【叫 制备IgG。 187 中国科协第四届优秀博士生学术年会论文集 1．3 CD3抗体治疗方法 仓鼠IgG，剂量均为5蟛只厌×5天，治疗后第二天开始割尾取血检测血糖。血糖逆转率计算方法如下： 100％ 血糖逆转率c％，=塑堕亘茎堕要寄啬芸案吾惹簧薹幽x 1．4 3HTdR掺入实验 无菌分离小鼠肠系膜淋巴结细胞，轻柔地将其揉碎，过细胞筛去除碎片获得单细胞悬液，离心后弃 上清，10％FCS 仪购自Wallac公司。 1．5流式细胞术 (FACSCalibur，BectonDickinson公司)检测CD3。r细胞比例的变化。 1．6胰腺组织病理 分离小鼠胰腺组织，10％甲醛固定，石蜡包埋切片，HE染色，显微镜下观察淋巴细胞浸润。胰腺炎 分级评分方法如下：0级，正常胰岛；l级，周围性胰腺炎，胰岛侵润程度25％：2级，胰岛侵润程度为 25％--一50％；3级，胰岛侵润程度50％；4级，残存萎缩的胰岛。 1．7统计分析 采用成组设计t检验和非参数累积生存分析。P0．05认为有显著性统计差异。 2结果 2．1短期小剂量CD3抗体治疗有效逆转新发I型糖尿病 岛组织中可出现大量淋巴、单核细胞的浸润，出生第12周血糖持续增高，随周龄增长糖尿病发病率可达 只)，连续5天治疗。治疗后第二天开始观察血糖变化。图1结果表明CD3抗体治疗后不同时间点小鼠血 糖逆转率的变化，治疗组小鼠到治疗后第9周时血糖逆转率达75％，观察时间超过30周；而对照组小鼠在 注射仓鼠埏G后第4周时血糖均持续性增高，血糖逆转率为0。