11-3.2.高效液相色谱仪.ppt

* * * * * * * 11-3.5.3.离子对色谱(Ion-Pair Chromatography) 保留机理： 反相离子对色谱分离水溶性维生素 手性高效液相色谱可分为手性固定相(chiral stationary phase，CSP)/非手性流动相和非手性固定相/含手性选择剂流动相，即手性流动相两种色谱技术。具实用价值手性流动相添加剂品种较少，这里主要介绍前者。 采用手性固定相CSP的高效液相色谱体系的流动相与一般分配色谱相似，根据CSP与流动相相对极性不同可构成正相或反相色谱，其中采用极性水溶性流动相的反相手性色谱应用较多。 11-3.5.4.手性色谱(Chiral chromatohgaphy) 1. 给体-受体手性固定相 这是Pirkle研究组最先开发的一类CSP,由含末端羧基或异氰酸酯芳香烃手性配体与氨基键合硅胶缩合，分别形成具手性取代芳香酰胺或脲型结构CSP，亦称为Pirkle手性固定相。 11-3.5.4.手性色谱(Chiral chromatohgaphy) 2.多糖类手性固定相 主要是纤维素及其衍生物CSP，以引进芳环的取代苯甲酸酯衍生化纤维素居多，如纤维素三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)，纤维素三(4-甲基苯甲酸酯)，纤维素三乙酸酯等。 3.环糊精手性键合固定相 亦称为空穴型固定相。环糊精简称CD，具手性空穴结构，CD-CSP可实施正相和反相两种色谱体系。 11-3.5.4.手性色谱(Chiral chromatohgaphy) 4.蛋白质手性固定相 一般通过含氨基、二醇基等键合硅胶中间体将蛋白质键合至硅胶上。这类CSP只能用于反相色谱体系。 以生物活性配体(如酶、抗体、激素等)通过间隔臂键合到多孔微粒固体基质为固定相，不同pH值的缓冲溶液为流动相，依据生物分子(氨基酸、肽、蛋白质、核酸等)与固定相配体间的特异、可逆的相互亲和作用力差异，即形成可离解的配位复合物，亦称为锁-键结构复合物或络合物(lock-and-key structural complex)，实现生物活性分子分离和纯化。 固定相由基质、间隔臂、和配体三部分组成。 1. 基质材料有天然和合成聚合物等有机基质。 2. 间隔臂通常为不同链长的双功能基化合物。 3. 固定相配体主要是:(1).染料;(2).具包结络合作用的大环化合物;(3).生物特效配体;(4). 与生物活性分子发生作用的药物， 11-3.5.5.亲和色谱(Affinity Chromatography) 11-3.5.5.亲和色谱(Affinity Chromatography) 此法是利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法。凡在溶液中能够电离的物质，通常都可用离子交换色谱法进行分离。它不仅适用无机离子混合物的分离，亦可用于有机物的分离，例如氨基酸、核酸、蛋白质等生物大分子。因此，应用范围较广。 11-3.6.离子交换色谱 离子交换色谱法是利用不同待测离子对固定相亲和力的差别来实现分离的。其固定相采用离子交换树脂，树脂上分布有固定的带电荷基团和可游离的平衡离子。当待分析物质电离后产生的离子可与树脂上可游离的平衡离子进行可逆交换，其交换反应通式如下： 阳离子交换： 阴离子交换： 11-3.6.1.离子交换平衡 达平衡时，以浓度表示的平衡常数（离子交换反应的选择系数）： 这里，[XR]s 、[YR]s和[X]m、[Y]m分别代表X、Y在固定相上和流动相中浓度。色谱过程分布平衡常数为溶质X在固定相和流动相浓度之比，上式重排得: 11-3.6.1.离子交换平衡 设色谱柱内离子交换剂的质量是WS，则固定相上溶质的量(mol或g)为[XR]SWS;柱内流动相体积Vm,溶质量为[X]mVm。溶质色谱保留值k为: 对于典型的磺酸型阳离子交换树脂，一价离子的KB/A值按以下顺序： Cs+＞Rb+＞K+＞NH4+＞Na+＞H+＞Li+ 二价离子的顺序为： Ba2+＞Pb2+＞Sr2+＞Ca2+＞Cd2+＞Cu2+，Zn2+＞Mg2+ 对于季铝型强碱阴离子交换树指，各阴离子的选择性顺序为： ClO4-＞I-＞HS04-＞SCN-＞NO2-＞Br-＞CN-＞Cl-＞BrO3-＞OH- ＞HCO3-＞H2P04-＞IO3-＞CH3COO－＞F－ 11-3.6.1.离子交换平衡 现在广泛应用的离子交换固定相主要是三种类型: 1. 苯乙烯和二乙烯苯交联聚合