实验九逆境（高温、低温、干旱）对植物的伤害及生理的影响（选做实验.doc

实验九：逆境（高温、低温、干旱）对植物的伤害及生理的影响（选做实验） I 高温和低温对植物的伤害 ［实验目的］ 了解生长的极端温度对植物的伤害作用。 ［实验原理］ 植物在遭遇不良环境（如高温、低温等）时，原生质的结构常受到影响，原生质膜的选择透性丧失，对物质的透性发生改变，盐类或有机物从细胞中渗出，进入周围环境中。通过电导度的测量和糖的显色反应，可以测知物质的外渗，表明植物受害的情况。 ［器材与试剂］ 1.实验仪器 电导仪，电冰箱，温箱，水浴锅，烧杯，量筒，移液管，试管，镊子 2.实验试剂 蒽酮试剂（取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释至1000mL而成） 3.实验材料 玉米或小麦种子 [实验步骤] 取玉米或小麦种子，用水吸胀，萌动后移到杯上蒙着的塑料窗纱上，杯中充以水，让根穿过网孔垂直伸入水中（也可将种子种植于湿砂中）。当苗长2～3cm时，即可用作实验材料。 取出幼苗，尽量不要伤害根系，用镊子除去幼苗上残留的胚乳，用蒸馏水漂洗数次，以除去伤口上的物质。然后10株为一组，共3组，分别放在盛有20mL蒸馏水的小烧杯中，务必将根系浸入蒸馏水中，将一杯放在45℃温箱中，一杯放在0～2℃冰箱中，另一杯留在室温20～25℃条件下。 3.经过一定时间后，用电导仪测量每一处理小杯中溶液的电导度。另外吸取溶液0。5mL于试管中，加入蒽酮试剂2mL，于沸水浴中加热15min，如果溶液变绿，即表明糖类的存在。另外蒸馏水作同样测定进行比较。 4.将结果记录于下表中 处理 电导度 蒽酮反应 1h 2h 3h 1h 2h 3h 45℃ 0～2℃ 室温 蒸馏水 注意事项 电导度的大小仅表示电解质总量的多少。 [实验作业 1.利用测量电导度和糖的显色反应，试比较水稻和小麦幼苗在低温和高温中受害的程度。 2.说明这种测量方法的实践意义。 参 考 文 献 山东农业学院等编.植物生理学实验指导.山东科学技术出版社，1980.308～310 谢田等.测定细胞膜透性的紫外吸收法.植物生理学通讯，1986（1）：45～46 II 干旱处理对叶片脂氧合酶活性的影响 [实验目的] 了解环境胁迫与脂氧合酶的关系及测定酶活性的方法。 实验原理 脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)是一种氧合酶,为非血红素铁蛋白,酶蛋白由单肽链组成,专门催化具有顺,顺-1,4戊二烯结果的不饱和脂肪酸的加氧反应,在植物中其底物主要亚油酸和亚麻酸。 植物在生长过程中受到细菌,真菌及外界恶劣环境的伤害,这些因素可诱导植物中LOX活性的增加,因而LOX活性大小可作为植物逆境生化指标之一。 利用LOX与不饱和脂肪酸作用时,在234nm处有一增加的紫外吸收,其与反应时间和酶浓度有关;以亚油酸为底物,应用分光光度法可得出脂氧合酶的活性。 [器材与试剂] 1.实验仪器 冷冻离心机,751分光光度计,旋转蒸发仪,石英比色杯 2.实验试剂 亚油酸，乙醇，吐温20，1mol/L氢氧化钠，考马斯蓝G 250，25mmol/L Tris – HCl缓冲液（pH 7.5），0.2mol/L磷酸缓冲液（pH = 7.0），储备液A（用乙醇配制质量浓度为1%的亚油酸溶液），储备液B（在7.1mL的储备液A中加入0.25mL吐温20。用旋转蒸仪将乙醇蒸发至尽，所剩膏状物用100mL0.05mol/L Na2HPO4溶解，并用1mol/L NaOH将pH调至9.0。该储备液中含有2.5mmol/L亚油酸及0.25%吐温20，底物溶液（将储备液B用磷酸缓冲液（pH = 7.0）稀释10倍，所得为底物溶液） 3.实验材料 大豆 【实验步骤】 1. 干旱胁迫处理 大豆室外盆栽（选用直径15cm、高14cm的小盆），播种出苗后，每盆留苗3株，苗龄5周时停止浇水进行干旱处理，对照正常浇水。 2.LOX的提取 在处理3d后取对照及经胁迫处理大豆的倒数第二片全展开叶各 0.5 g，分别加入5mL预冷的Tris – HCl缓冲液（pH 7.5），于冰浴中研磨，2℃下以28000 X g离心15min，上清液即为酶提取液。 3. 比色分析 对照管加入 2.4mL底物溶液和 0.1mL蒸馏水，用于分光光度计调零（234nm）。样品管依次加入2.4mL底物溶液和0.1mL酶提取液，迅速混匀，置于光路中测定234nm处反应体系的光密度，纪录下初始（0min）OD值，每隔30 s 纪录一次OD值，共测15min，以OD值和反应时间作图。（注意：加入酶溶液到开始纪录OD值的时间不能超过10 s 。）光密度的变化率（△OD/min）由图的最初线性部分计算得出。