DB××××××—××××1DB33T691—2008前言本标准附录A为资料性.doc

前 言 本标准附录A为资料性附录。 本标准由浙江省水产标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位：浙江省海洋水产品质量检验中心、舟山市富丹旅游食品有限责任公司。 本标准主要起草人：王萍亚、周勇、张薇英、黄鹂、戴意飞、王维洁、江旭华。水产品中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素残留量的测定-高效液相色谱荧光检测法 范围 本标准规定了水产品中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的高效液相色谱荧光测定方法。 本标准适用于水产品中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 原理 样品经柠檬酸缓冲液提取，正己烷脱脂，固相萃取柱净化，用高效液相色谱荧光检测器检测，外标法定量。 试剂与材料 4.1 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682中一级水标准。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 正己烷。 4.4柠檬酸。 4.5磷酸氢二钠（Na2HPO4）。 4.6 乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）。 4.7磷酸二氢钠（NaH2PO4?2H2O）。 4.8 磷酸二氢钾（KH2PO4）。 4.9 咪唑。 4.10 醋酸镁。 4.11 冰醋酸：优级纯。 4.12 柠檬酸缓冲液：准确称取柠檬酸（4.3）21.0g，用水溶解稀释至1000mL（A液）。准确称取磷酸氢二钠（4.4）71.6g，用水溶解稀释至1000mL（B液）。准确称取乙二胺四乙酸二钠（4.5）1.86g，用307mL A液和193mLB液溶解混匀。 4.13 0.01mol/L磷酸二氢钠溶液：准确称取1.56g磷酸二氢钠(4.6)，加适量水溶解，定容至1000mL。 4.14 1.36%磷酸二氢钾溶液：准确称取13.6g磷酸二氢钾（4.7），加适量水溶解，定容至1000mL。 4.15 咪唑缓冲溶液：准确称取68.06 g咪唑（4.8）、0.37g乙二胺四乙酸二钠（4.5）及10.27 g醋酸镁（4.9）溶于800 mL水中，用冰醋酸（4.10）调pH至7.2，再用水定容至1000mL，以微孔滤膜（0.45μm）过滤后备用。 4.16 标准品：土霉素（OTC）、四环素（TC）、金霉素（CTC）、强力霉素（DOTC），纯度﹥99%。 4.17 混合标准储备溶液：准确称取土霉素10.0mg、四环素10.0mg、金霉素20.0mg，强力霉素20.0mg，溶于磷酸二氢钠（4.12）溶液中，定容至100.0mL，此溶液每毫升含土霉素100μg、四环素100μg、金霉素200μg、强力霉素200μg。本溶液于0℃～4℃保存，一周内有效。 4.18 混合标准中间溶液：准确移取4.16中的混合标准溶液10.0mL，用水定容至100.0mL，配成每毫升含土霉素10μg、四环素10μg，金霉素20μg、强力霉素20μg的混合标准中间溶液。 4.19 混合标准工作溶液：以混合标准中间溶液（4.10）配制土霉素、四环素标准使用浓度系列：0.05、0.25、0.50、1.0、2.5、5.0μg/mL；以混合标准中间溶液（4.10）配制金霉素、强力霉素标准使用浓度系列：0.10、0.50、1.0、2.0、5.0、10.0μg/mL。此标准工作液临用时现配。 4.20 微孔滤膜，0.45μm。 仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪：配有荧光检测器。 5.2 pH计。 5.3 电子天平：感量为0.0001g和.01g。 5.4 高速组织捣碎机。 5.5 聚丙烯离心管。 5.6 均质器：﹥10000 rpm。 5.7 离心机：5000 rpm。 5.8 固相萃取柱：Waters Oasis HLB小柱（6mL，200mg）或同类型小柱。 5.9 固相萃取装置带负压抽滤器。 5.10 旋转蒸发仪。 分析步骤 6.1 样品制备 从原始样品中取出部分有代表性的样品，高速组织捣碎机（5.4）捣碎。四分法缩分出不少于500g样品，混匀，均分成两份。装入清洁容器，加封，标明标记。-18℃以下冷冻保存。 6.2 提取 称取约5g样品（精确至0.01g）置于50mL聚丙烯离心管（5.5）中，加入柠檬酸缓冲液（4.11）30mL，以10000rpm均质3min，再于室温下以3000 rpm离心10min，上清液移入100mL分液漏斗中，残留物用20mL柠檬酸缓冲液同法均质1-3min（10000rpm），3000 rpm离心10min，合并上清液于100mL分液