微生物生长曲线之测定.doc

微生物生長曲線之測定 環二B 吳季庭.龔筑蓁.王禾迎 實驗目的 (1)了解細菌生長曲線特點及測定原理 (2)學習用分光光度計測定細菌的生長曲線? (3)了解生長曲線的四個原理 實驗原理 把少量的細菌接種到合適的液體培養基中，在適宜的條件下培養，定時取樣測定單位體積的细胞數，並繪製所得的曲線：以細菌細胞數目的對數做縱座標，以培養時間為橫座標，得出細菌在生長過程中的曲線圖。根據生長曲線的變化規律，可分為延滯期、對數生長期、穩定期、衰亡期四個階段。 材料 燒杯、酵母菌粉、培養液、葡萄糖、取藥勺、光電比色管、酒精燈、玻璃滴管、玻璃試管、三角錐瓶、定量玻璃吸管、量筒、不繡鋼吸管筒、秤藥祇、電子天平、恆溫水浴振盪器、分光光度計、標籤紙。 方法 (1)取0.5克酵母菌粉+50ml培養液+1g葡萄糖，均勻混合。 (2)用分光光度計測吸光值。(3)塗碟法 用0.1ml的菌液。(4)把沒稀釋過的菌液放置恆溫水浴震盪器內培養15分鐘後取出。(5)稀釋至10^-4 並重複動作(塗抹、測吸光值) 共計6次。(6) 之後塗碟好的6個培養基放入37度恆溫箱內，隔天觀察。 實驗結果 時間(min) 0 15 30 45 60 75 吸光度值 1.792 1.767 1.752 1.735 1.722 1.696 ※菌落計數有效範圍：為30 -300c fu/(g or ml) 時間與菌落數紀錄表 時間(min) 0 15 30 45 60 75 菌落數 128 77 7 20 9 11 時間與吸光度 時間與菌落數 問題與討論： (1)說明各組實驗結果(包刮數據與圖形)之生長曲線進行至哪一 期，此圖形有何意義？ 0~30分:對數期 30~60分:穩定期 60~75分:死滅期 這次做的數據，原本時間對照的時間應該依上面的時間與左邊的圖為標準，但是這次做的數據好像出了點問題，最清楚的是死滅期吧!連熱戀、穩定交往中都沒有，就決定分手。從頭到尾都在吵架，可見感情有多麼不好，連我們自己做的看了都無奈。 (2)測定微生物的生長曲線在微生物學上有何意義？ 為了了解微生物生長情形、生理特性與培養特徵，必需進行微生 物的測定，其測定方法包括檢測微生物細胞的數量、重量以及活性。 (3)說明分光光度計的測定原理與實驗步驟。 原理: 當光通過菌液時，這些微生物會吸收光或使光折射，光線被 折射或吸收的量與微生物濃度，其吸光度愈大，微生物數量也就越 多，最後可得到生長曲線。 步驟: 用595nm之分光光度計定時檢測菌液之吸光度，使光穿透 過菌液。 6.心得: 吳季庭:這次的實驗說難不難說簡單，說簡單又好像沒那麼簡單，不然怎麼可能這麼簡單的實驗，數據還會出錯呢?老師順過還看了數據，就說死定了!會分數很低，害我好緊張但不知道錯誤在哪裡。結果回來整理數據才驚覺錯的離譜，做實驗最後一組走還沒做個漂亮的實驗出來，真的讓人覺得好噢。 王禾迎: 這次的實驗還蠻簡單的，只是每次都要一直等15分鐘，有點久而已，大家都做完只剩下我們，感覺好孤單，值日生一直在等我們做完，害我們很不好意思，可是還是要等時間到，這次做的實驗，雖然很順利，但實驗的數據卻不是很理想，我們做的實驗吸光值一直往下掉，真的很誇張，實驗步驟也沒錯，到底錯在哪呢!! 可能我們感情不好吧!!一直處於死滅期。這是我們找出的唯一原因，不然就是他跟我們作對吧!!看我們都沒做錯才這樣。 龔筑蓁:第一次寫微生物實驗作業還迷迷糊糊，所以也漏掉了心得，第二次寫微生物實驗作業，竟然數據忘東忘西，真後悔當下做實驗時沒抄下來重要的數據數值。這次，超開心的，因為我邊做邊學更邊記邊記還不夠，更是用紙筆紀錄下來。以至於這次的作業還提早好幾天做完，這是我第一次做作業這麼有成就感這麼開心。關於這次的實驗跟直接計數和間接計數沒有太大的不同，前面都要配置酵母菌液，但測吸光值卻發生了問題，我們的數據卻明顯下降，看來我們的實驗步驟有很大的失誤，所以更應該以更細心做每個實驗了。 7.參考文獻： /biotech/exp/MicrobeExp/2007/8458.html