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04-药物定量分析与分析方法验证.doc
第四章 药物定量分析与分析方法验证
第一节 定量分析方法特点
定量分析方法:重量分析法、容量分析法、光谱分析法、色谱分析法
一、重量分析法
用适当的方法将被测组分与试样中其他组分分离后,转化成一定的称量形势(使药物生成沉淀),称重,从而求得该组分含量的方法。
生成沉淀 → 过滤 → 洗涤 → 灼烧 → 恒重。
特点:结果准确,但操作繁琐。
二、容量分析法
为经典方法,原料药分析常采用。
指示剂和灵敏度是影响结果的原因之一,常产生滴定误差;
特点:
1、快速,准确,灵敏度高
2、适合于中、高含量组分分析(1%)
3、仪器简单,操作方便,适用范围广
三、光谱分析法——UV、IR、MS、NMR和荧光分析
1、紫外可见分光光度法
灵敏度和准确度高;
价格低、适用范围广,一般适用于纯组分的分析,如原料药或单组分制剂(无辅料干扰),
计算分光光度法可测定多组分制剂的含量,现已基本不用。
2、红外分光光度法和核磁共振波谱法
IR——分析官能团的存在。
NMR——分析氢分布、碳骨架及分子间相互耦合情况等;
适用于定性,定量应用较少。
3、质谱法
在联用技术中用于定性和定量,灵敏度高(ng),在生物样品分析中应用广泛。
4、荧光分析法
灵敏度高(pg),但适用范围有限,应用衍生化方法较多,在生物大分子分析中应用较多。
四、色谱分析法
HPLC —— 适用范围广
GC —— 使用有限制,多用于具有挥发性药物的分析
TLC——很少用于定量,多用于定性。
1、系统适用性试验:
理论塔板数、分离度、重复性、拖尾因子
2、定量方法:面积归一化法,内标法、标准曲线法、外标法等。
3、色谱法特点:
(1)条件选择范围宽:包括色谱柱、流动相、检测器等。
(2)应用范围宽:以HPLC为最广泛。
(3)灵敏度高,准确度好,重现性好。
(4)操作繁琐,实验消耗大。
(5)多组分的分离分析,与光谱等联用,可进行定性和定量分析。
第二节 定量分析的计算
一、滴定度
1、定义:指每1ml某摩尔的滴定液所相当的被测药物的质量,CHP用mg来表示。
2、计算:
aA(滴定液)+bB(待测物)→ cC+dD
(mg/mL)
二、百分含量计算
(一) 直接滴定法:
(二) 回滴定法(剩余滴定法)
先加入定量过量的滴定液A,使其与被测药物反应,待此反应进行完全后,再用另一滴定液B来回滴反应中剩余的滴定液A。
1、不做空白试验的含量计算方法
2、做空白试验的含量计算:
第三节 药品质量标准分析方法验证
一、验证分析项目
1、鉴别试验
2、杂质定量或限度检查;
3、有效成分含量测定;
4、制剂中其它成分(降解产物、防腐剂等)的测定;
5、 溶出度、释放度等功能检查中,溶出量的测定方法。
二、验证内容
1 专属性;2 检测限;3 定量限;4 精密度;5 线性及其范围;6 准确度;7 耐用性
(一) 专属性
1、定义:指在其他成分(杂质和制剂辅料等)可能存在下,采用的方法能准确测出被测物的能力。
2、意义:分析复杂样品时衡量其是否受到干扰程度的一种方法。
3、测定法:
如测定定坤丸中人参皂苷Re和Rb1的含量:
阴性对照溶液的制备:按处方比例称取除人参以外的其余药味,按制备工艺制成,按“供试品溶液制备”项下方法制得缺人参的阴性对照溶液。在上述色谱条件下,精密吸取20 (L进样,观察样品峰的保留时间处是否有杂质峰。测得结果表明:样品峰保留时间处无杂质峰干扰(见附图4-1)。
二、检测限 (limit of detection, LOD)
1、定义:试样中被测物能被测出的最低浓度或量。
2、意义:LOD 是一种限度检验的效能指标,它反映方法与仪器的灵敏度和噪音大小,也表明样品经处理后空白值的高低。
3、测定法:
(1) 非仪器分析——目视法
用已知浓度的被测物,试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。
(2) 仪器分析
一般以信噪比(S/N= 3或2)时的相应浓度或注入仪器的量确定为检测限。
4、数据要求
附测试图谱,说明测试过程和检测限结果。
三、定量限(1imit of quantitation,LOQ)
1、定义:样品中被测物能被定量测定的最低量,结果应具有一定准确度和精密度。
2、测定法:
(1) 以信噪比(S/N)为10时相应的注入仪器的药物浓度或量进行确定。
(2) 以仪器所测空白背景响应标准差(SD)的10倍为估计值,再经试验确定。
四、精密度
1、定义:在规定的测试条件下,同一个均匀样品经多次测定所得结果彼此符合程度。
2、表示方法:
偏差(d):
标准偏差(SD):
相对标准偏差(RSD):
4、表达形式:
(1) 重复性:相同条件下,同一个分析人员测定所得结果的精密度。
测定法:
①
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