04-药物定量分析与分析方法验证.doc

第四章 药物定量分析与分析方法验证 第一节 定量分析方法特点 定量分析方法：重量分析法、容量分析法、光谱分析法、色谱分析法 一、重量分析法 用适当的方法将被测组分与试样中其他组分分离后，转化成一定的称量形势（使药物生成沉淀），称重，从而求得该组分含量的方法。 生成沉淀 → 过滤 → 洗涤 → 灼烧 → 恒重。 特点：结果准确，但操作繁琐。 二、容量分析法 为经典方法，原料药分析常采用。 指示剂和灵敏度是影响结果的原因之一，常产生滴定误差； 特点： 1、快速，准确，灵敏度高 2、适合于中、高含量组分分析（1%） 3、仪器简单，操作方便，适用范围广 三、光谱分析法——UV、IR、MS、NMR和荧光分析 1、紫外可见分光光度法 灵敏度和准确度高； 价格低、适用范围广，一般适用于纯组分的分析，如原料药或单组分制剂（无辅料干扰）， 计算分光光度法可测定多组分制剂的含量，现已基本不用。 2、红外分光光度法和核磁共振波谱法 IR——分析官能团的存在。 NMR——分析氢分布、碳骨架及分子间相互耦合情况等； 适用于定性，定量应用较少。 3、质谱法 在联用技术中用于定性和定量，灵敏度高(ng)，在生物样品分析中应用广泛。 4、荧光分析法 灵敏度高（pg），但适用范围有限，应用衍生化方法较多，在生物大分子分析中应用较多。 四、色谱分析法 HPLC —— 适用范围广 GC —— 使用有限制，多用于具有挥发性药物的分析 TLC——很少用于定量，多用于定性。 1、系统适用性试验： 理论塔板数、分离度、重复性、拖尾因子 2、定量方法：面积归一化法，内标法、标准曲线法、外标法等。 3、色谱法特点： （1）条件选择范围宽：包括色谱柱、流动相、检测器等。 （2）应用范围宽：以HPLC为最广泛。 （3）灵敏度高，准确度好，重现性好。 （4）操作繁琐，实验消耗大。 （5）多组分的分离分析，与光谱等联用，可进行定性和定量分析。 第二节 定量分析的计算 一、滴定度 1、定义：指每1ml某摩尔的滴定液所相当的被测药物的质量，CHP用mg来表示。 2、计算： aA（滴定液）＋bB（待测物）→ cC＋dD (mg/mL) 二、百分含量计算 (一) 直接滴定法： (二) 回滴定法（剩余滴定法） 先加入定量过量的滴定液A，使其与被测药物反应，待此反应进行完全后，再用另一滴定液B来回滴反应中剩余的滴定液A。 1、不做空白试验的含量计算方法 2、做空白试验的含量计算： 第三节 药品质量标准分析方法验证 一、验证分析项目 1、鉴别试验 2、杂质定量或限度检查； 3、有效成分含量测定； 4、制剂中其它成分(降解产物、防腐剂等)的测定； 5、 溶出度、释放度等功能检查中，溶出量的测定方法。 二、验证内容 1 专属性；2 检测限；3 定量限；4 精密度；5 线性及其范围；6 准确度；7 耐用性 (一) 专属性 1、定义：指在其他成分（杂质和制剂辅料等）可能存在下，采用的方法能准确测出被测物的能力。 2、意义：分析复杂样品时衡量其是否受到干扰程度的一种方法。 3、测定法： 如测定定坤丸中人参皂苷Re和Rb1的含量： 阴性对照溶液的制备：按处方比例称取除人参以外的其余药味，按制备工艺制成，按“供试品溶液制备”项下方法制得缺人参的阴性对照溶液。在上述色谱条件下，精密吸取20 (L进样，观察样品峰的保留时间处是否有杂质峰。测得结果表明：样品峰保留时间处无杂质峰干扰（见附图4-1）。 二、检测限 (limit of detection, LOD) 1、定义：试样中被测物能被测出的最低浓度或量。 2、意义：LOD 是一种限度检验的效能指标，它反映方法与仪器的灵敏度和噪音大小，也表明样品经处理后空白值的高低。 3、测定法： (1) 非仪器分析——目视法 用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。 (2) 仪器分析 一般以信噪比（S/N= 3或2）时的相应浓度或注入仪器的量确定为检测限。 4、数据要求 附测试图谱，说明测试过程和检测限结果。 三、定量限（1imit of quantitation，LOQ） 1、定义：样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度。 2、测定法： (1) 以信噪比（S/N）为10时相应的注入仪器的药物浓度或量进行确定。 (2) 以仪器所测空白背景响应标准差(SD)的10倍为估计值，再经试验确定。 四、精密度 1、定义：在规定的测试条件下，同一个均匀样品经多次测定所得结果彼此符合程度。 2、表示方法： 偏差（d）： 标准偏差(SD)： 相对标准偏差(RSD)： 4、表达形式： (1) 重复性：相同条件下，同一个分析人员测定所得结果的精密度。 测定法： ①