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进一步的Southern杂交分析显示，上述3个标记均位于该重叠群中的一个 除和互补试验，期望尽快能完成彳隰A七m的克隆。 M她，一个新的ANK蛋白在稻瘟菌的菌丝生长 和致病性中起着重要作用 马星霞，彭友良 (中国农业大学植物病理学系，农业部分予植物病理学重点开放实验室北京100094) 锚蛋白重复序列(ANK，ankyrinrepeat)是在许多蛋白中含有的～种序列模 块，指相对保守的33个氨基酸的重复出现。这种模块首先在两个酵母细胞周期 了含有24个这种重复序列的结构，因此而得名。ANK蛋白质在生物体广泛存在， 从病毒、原核生物、真核生物到人体，从细胞核、细胞质到胞间质都有报道：在 结构域介导蛋白质与蛋白质相互作用，能够和多种配体结合，行使纷繁复杂的生 物功能。稻瘟菌中基因组中编码可能ANK蛋白的基因大约有51个，作者对其 中的一个基因MgAR2在稻瘟茵的生长、发育和致病性中的作用进行了研究。 梨孢菌中一个新的细胞周期调控蛋白为该菌产孢所必需 王维香，孙静， 彭友良 (中国农业大学农业部分子植物病理学实验室，北京100094) 由梨孢菌(Magnaporthegrisea)引起的水稻稻瘟病是世界水稻产区广泛发 生的的水稻病害，也是水稻病害中最重要的病害之一。梨孢菌的分生孢子由三个 细胞组成，平均每个分生孢子梗上着生8—10个分生孢子。该菌的分生孢子是侵 染水稻的主要初侵染源和再侵染源， 因此，研究梨孢菌的产孢调控的分子机理 具有重要的应用价值。 本文通过筛选稻瘟菌REMI转化体库，获得一个突变体$3514。该突变体与 野生型P131相比，其表型为：产孢量明显减少，其产孢量减少80％～85％；绝大 多数分生孢子梗只着生一个分生孢子；在洋葱表皮上，分生孢子萌发后生长出短 粗的分枝，但孢子萌发率、附着胞形成率和侵染钉形成率与野生型没有明显差异。 Blot 有性杂交和Southern印迹杂交结果表明，$3514的突变表型与潮霉素插入 标记共分离，插入质粒是单位点、单拷贝插入。 通过质粒拯救获得插入位点左边侧翼序列，通过PCR法获得插入位点右边 侧翼序列。将拯救的基因组序列测序后与稻瘟菌70．15基因组全序列比较，并进 行GENSCAN预测。结果表明，插入所破坏的基因位于～个9．6kb的DNA片段， 该基因编码一个含1314个氨基酸残基的蛋白质。氨基酸BLAST结果显示，推 定的氨基酸序列与一个来自几种子囊菌中调控细胞周期的蛋白cwfl8有一定相 似性，并和人类的一种DNA结合蛋白有一定的序列相似性。 为了克隆并验证控制该突变表型的基因，以侧端序列为探针筛选稻瘟菌TAC 文库，获得5个阳性克隆。进一步根据基因组序列设计引物扩增阳性克隆，获得 了包含目的基因的9．6kp的DNA片段。以此片段构建互补载体，转化$3514， 获得的互补转化体恢复野生型。结果初步证明质粒插入的基因导致的突变影响到 分生孢子产孢量，分生孢子梗成熟等多种性状。此外，我们还将该基因用潮霉素 抗性基因替代该目标基因，构建了Gene replacement转化载体，转化野生型131， 敲除转化体的验证和表型观察正在进行之中。 一个新的锌指蛋白控制梨孢菌分生孢子产生 张裕君，彭友良 (中国农业大学植物病理学系农业部分子植物病理学重点开放实验室，北京100094) 梨孢菌(Magnaporthegrisea)引起水稻稻瘟病，该病是水稻最重要的真菌 病害之一。梨孢菌产生分生孢子，是稻瘟病侵染循环中的初侵染源和再侵染源， 是引起病害不可缺少的。研究梨孢菌的产孢调控的分子机理具有重要的应用价 值。 通过筛选梨孢菌的REMI突变体库，作者获得了一个突变体ZN5．1。与野生 型菌株P131相比，该突变体完全失去了产孢能力。遗传共分离分析结果表明： 遗传杂交后代中，所有抗潮霉素的后代都表现突变型，不抗潮霉素的后代都表现 野生型，说明该突变体的突变表型与抗性标记共分离，即突变表型是由于质粒插 入引起的。进一步SouthemBlot证明：该突变体含有单位点、单拷贝的质粒插入， 与共分离分析结果吻合。通过质粒拯救，作者获得了质粒插入侧端的部