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用氧化苏木精指示电极测定牛奶中残留青霉素 刘平(。，朱亚琦1，马洁‘1，薛颖2，吴国华2，王皓1 (1首都师范大学化学系北京100037) (2北京市疾病预防控制中心北京100013) 青霉索是一种高效广谱抗生索类药物，广泛用于治疗奶牛乳腺炎，由于频繁地以超 剂量使用，造成其在牛奶等动物源食品的残留，严重影响食用者的身体健康。牛奶中青 霉素残留的检测，国内主要依据国标GB4789．27—94鲜乳中抗生素残留量检测方法，主要 包括试管法和平板法，国外常用的方法有高效液相色谱法、微生物法、免疫酶联试剂盒 法及放射免疫测定法，但上述方法因过程繁琐或价格昂贵而不适用于曰常检测。生物电 化学传感器由于其所特有的测定快速、简便、灵敏、经济等优点，比较适合现代化奶业 发展需要。应用生物电化学传感器测定青霉素的研究已有报道，丰要有离子敏场效应晶体 管传感器、微生物传感器和酶传感器等。但上述传感器大部分都以检测高浓度青霉素为 目标，且多以电位为响应信号，由于青霉素酶催化青霉素发生水解反应，无电流信号产 生，因此用电流型生物传感器测定青霉素的报道较少“’。本文将有机染料氧化苏木精和青 檬素酶同时修饰在电极上，制成了测定残留青霉素的pH敏电流型生物电化学传感器。同 时应用纳米金胶在电极上构建优良的仿生功能界面”’，独创性的增加了交联膜的导电性， 获得了灵敏的响应信号，使传感器的稳定性和重复性太大加强且测定过程简单易行。 1 结果和讨论 1．1纳米金胶的电镜表征 图1是纳米金胶的透射电镜图，经测量粒子的平均粒径为11．91nm，可用于以下的 电极修饰用。 1．2基底电极及工作电位的选择 分别以铂盘电极和金盘电极为基底电极制各传感器， g·m|1青霉索G钠的磷酸缓 用传感器对pH=7．5，含10u 冲溶液进行计时电流测定，记录电流与电位的关系。对于 铂电极传感器，当电位达到一0．15V时，电流基本达到稳 定，而金电极传感器电流达到稳定的电位为一0．25V。工 作电位越负，理论上传感器灵敏度越高，但溶液中共存的 ’“““”‘ 其它电活性物质也越容易在电极上被直接还原“1，因此选 图1 纳米金胶的透射 作电位为一0．17v。 电镜图(300000倍) 1．3指示剂选择 +通讯联系人：马洁，Tel：OlOE-mail：jicma@public．bta．ncLcn 北京市自然科学基金资助项目(KZ200410028012) 202 nmaol。L_1 不同指示剂对}r的敏感程度不同，实验了0．5retool·L-1、5retool·L．1、50 的氧化苏木精、中性红、甲基橙、亚甲基蓝、酚酞、甲基红和甲基蓝七种指示剂在支持 电解质为3mol·L-1KCI，pH依次为9、8、7、6、5的水溶液中的循环伏安响虚，其中氧 化苏木糟对}r的敏感程度最佳，故以氧化苏木精为探针制各传感器。 1．4膜厚度、组成及底液酸度选择 。 将600001U·mL’1膏霉素酶PBS溶液、质量分数为to％的牛血清白蛋白溶液、质量 分数为5％的戊二醛溶液、50mmol·L．1氧化苏本精溶液和纳米金胶按比例I：l：l：1： l混合，取不同体积混合液修饰于铂电极表面，进行计时电流测定。电极表面氧化苏木糟 还原的计时电流值与壬I+浓度在pH为9．O～5．0范围内均有良好的线性关系。但青霉紊酶 在pH为7左右活力最佳，且青霉素G钠在碱性较强的溶液中可发生水解反应，因此选 择磷酸缓冲溶液的pH为7．5作为起始pH值进行下述测定。 1．5修饰电极在磷酸缓冲溶液中的工作曲线 图2 (a)修饰铂电极在磷酸缓潲液中的工作曲线