高效液相法测定八角属部分植物果实中莽草酸的含量.docVIP

高效液相法测定八角属部分植物果实中莽草酸的含量 　　[摘 要]目的：建立莽草酸含量测定方法。方法：采用NH2键合相硅胶柱，乙腈-2%H3PO4（95：5）为流动相，检测波长213 nm，HPLC法。结果：平均回收率为98.5%，RSD为1.67%（n=5）。结论：适用于含莽草酸药材及制剂的质量控制。 　　[关键词]二极管阵列高效液相色谱法；莽草酸；八角属 　　中图分类号：F85 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）10-0279-01 　　1 药品与试剂 　　莽草酸对照品为本室自制，熔点184～186℃，其IR，EI-MS，13CNMR及lHNMR与文献一致，色谱归一化法测得含量为98.22%；乙腈为色谱纯；H3PO4为色谱纯。 　　2 仪器及色谱条件 　　惠普HP1050液相色谱仪，二极管阵列检测器；化学工作站。H66025型超声清洗仪（无锡市超声电子设备厂）。 　　色谱柱：ZORBAX NH2（5μm，4.6 mm×150mm）；流动相：乙-2%H3PO4（95：5）；流速：1ml?min-1；测定波长213 nm，带宽4nm；参比波长300 nm，带宽80 nm。衰减9；柱温：室温；柱效以莽草酸计，理论塔板数应不低于5400。 　　3 方法学考察 　　3.1 样品提取条件优化 　　精密称取干燥的红茴香果实粉末（过40目筛）约0.3 g，分别精密加入30 ml（1～5号）、40 ml（6号）甲醇，精密称重，按下述条件超声提取（250W）。提取完毕后再精密称重，以甲醇补足至原重量。取5ml上清液，以0.45μm微孔滤膜滤过，滤液进样，外标一点法测定含量，并对测定结果进行q检验。检验结果表明各条件间无显著性差异，样品供试液的制备采用以下条件。 　　样品供试液的制备：精密称取干燥的八角属植物果实粉末（过40目筛）约0.2 g，精密加入20 ml甲醇，称重，超声提取（250 W）20 min，提取完毕后再精密称定，以甲醇补足至原重量，取5ml上清液，以0.45μm微孔滤膜滤过，滤液作为样品供试液。 　　3.2 标准曲线制备：精密称取莽草酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.3 mg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液2.5，5.0，10.0，15.0，17.5μl进样，测定色谱峰峰面积，并以色谱峰峰面积对对照品的量回归（包括原点），得回归方程为A=147.83+3285.56m，r=0.9995，其线性范围为0.61～4.27μg，可用外标一点法测定。 　　3.3 精密度试验：精密吸取莽草酸对照品溶液5μl，重复进样6次，测得色谱峰峰面积平均值为4191.7，RSD为1.23%，符合分析要求。 　　3.4 回收率试验：精密称取红茴香果实粉末约0.1 g，在其中精密加入莽草酸对照品约5 mg，以下按样品供试液制备及样品测定项下操作测定，测定结果见表1，其平均回收率为98.5%，RSD为1.70%，符合分析要求。 　　3.5 重复性试验：取同一品种样品，按样品测定法重复测定5次，测莽草酸含量平均值为4.66%，RSD为1.95%，符合要求。 　　4 样品测定 　　按上述样品液制备方法制备各样品供试液，精密吸取样品供试液5～15μ1，莽草酸对照品溶液10μ1，分别进入高效液相色谱仪，测定色谱峰峰面积，计算含量，见表2。莽草酸对照品及样品的HPLC色谱图见图1，图2。 　　5 讨论 　　5.1 就本文的色谱条件，对样品中莽草酸的色谱峰作过光谱及纯度检查（光谱归一化法及吸收比率图），同时以薄层色谱为对照[展开剂为甲醇-氯仿-甲酸（2：7.5：0.5），λs=213 nm，λR=350 nm]，说明在此点样量及测定条件下莽草酸的色谱峰为单一成。 　　5.2 综上所述，本文建立的方法可用于莽草酸的资源研究及含莽草酸制剂的质控研究。 　　参考文献 　　[1] 黄建梅，刘慧，杨春澍等.八角科16种植物果实的形态鉴别.中草药，2000，31（1）：54. 　　[2] 张俊巍.红花八角茎叶化学成分研究.中国中药杂志，1989，14（1）：59. 　　[3] 方玉珍，宋杰云，岑燕飞，等.毒八角酸的镇痛作用研究.贵阳中医学院学报，1989，（1）：59. 　　[4] 马怡，孙建宁，徐秋萍，等.莽草酸对血小板聚集和凝血的抑制作用.药学学报，2000，35（1）：1. 　　[5] 陈歆， 龚晶晶，彭黎旭.八角茴香中莽草酸不同提取方法的初步研究[J].热带农业科学， 2015（11）. 　　作者简介：马雯雯，性别：女，出生年月日：1982年，8月，籍贯：安徽省，单位：哈尔滨誉衡药业股份有限公司，职称：工程师，学历：本科. 4