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胰岛素(INS)诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 文件编号 编写者 审核者 批准者 医院 医院： 科： 室： 胰岛素诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 版本： 执行日期： 共3 页 第 1 页 1.原理 试剂盒采用双抗体夹心一步法：抗人胰岛素单抗包被于96孔荧免板；依次加入标准品/样本、铕离子(Eu3+)标记的抗胰岛素单抗，标准或样品中的胰岛素与包被单抗及Eu3+标记单抗于微孔内发生免疫反应，在微孔表面形成夹心免疫复合物（包被单抗—胰岛素—Eu3+标记单抗）。洗涤去除游离的Eu3+标记单抗，加入荧光增强液，微孔表面免疫复合物上的Eu3+被荧光增强液解离，并形成稳定的荧光配合物，荧光强度与标准或样品中的胰岛素浓度呈正比例，通过标准曲线可得出样品中胰岛素浓度。 2.样本处理 穿刺取血，离心后允许有凝结，用肝素作抗凝结的血浆也可，不要采用溶血的血清或血浆样本。2～8℃条件下样本可保存5天，–20℃可保存更长时间。样本避免反复冻融。不必要的情况下不要将样本放置在室温。室温放置48小时以上的样本不能给出可靠的结果。 3.试剂 本科室使用苏州新波生物技术有限公司胰岛素（INS）时间分辨免疫荧光法诊断试剂盒，试剂盒主要组分如下： 胰岛素校准品:1套 1.0ml/瓶 冻干品(复融后储存于2-8℃，一个月内使用) 铕标记物：1瓶(1.0m1)，冻干品(复融后储存于2-8℃，两个月内使用) 分析缓冲液：1瓶(20 m1) 浓缩洗液：1瓶(40 m1)，使用前用去离子水做1：25倍稀释 增强液：1瓶(30 m1) 微孔反应板：一块(12孔*8) 吸头：20支 说明书：1份 自封袋:1个 医院： 科： 室 胰岛素诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 版本： 执行日期： 共 3 页 第 2 页 4.仪器（用户自备） 时间分辨荧光分析仪； 微孔洗涤机； 微孔振荡器； 5.操作步骤 试剂的准备：(1)将浓缩洗液做1：25倍稀释，作为工作洗涤液；(2)校准品:在校准品中加入1.0ml去离子水,复融约20分钟,混匀备用；（3）铕标记物：在铕标记物冻干品中加入1.0ml去离子水,复融约20分钟,混匀备用,使用前一小时内将铕标记物按所需量1：25倍稀释并一次用完（使用一次性的塑料容器来配制）。 将试剂及所需数量的微孔反应条置室温(20—25℃)平衡。 取50ul校准品及待测样本，按顺序加入微孔反应条小孔中。 然后在各微孔内加入100ul已稀释的铕标记溶液,在室温(20-25℃)下，用振荡器慢档震荡30分钟。 用微孔洗涤机洗涤6次,将板条在洁净的吸水纸上拍干。 每孔中加入增强液200u1(加样过程中避免碰到小孔边缘或其中的试剂，尽量避免污染)。 微孔反应条用振荡器慢档震荡5分钟。 选择相应程序检测。 6.结果判断： 6．1结果测定 用本公司ANYTEST2000时间分辨荧光测定仪或WALLAC公司时间分辨荧光测定仪（1230、1234、1420）测量时，检查程序的参数是否如下所示。如不符，请修改。 ASSAY TYPE（分析类型）：IFMA（时间分辨免疫荧光分析法） FITTING METHOD（曲线拟和方式）：PLINE SMOOTHED（平滑样条函数） X-AXIS（X轴）：LOG Y-AXIS（Y轴）：LOG-B BLANKS（背景孔数）：2 STANDARDS（参考标准点）：5 STANDARDS REPLICATES（参考标准点复孔数）：2 STANDARD CONC（参考标准点浓度）：B 6 μU/ml STANDARD CONC（参考标准点浓度）：C 16.5 μU/ml STANDARD CONC（参考标准点浓度）：D 53 μU/ml STANDARD CONC（参考标准点浓度）：E 107 μU/ml STANDARD CONC（参考标准点浓度）：F 230 μU/ml UNKNOWN REPLICATES（待测样品孔数）：1 2结果判读：用本试剂盒对70份正常人血清进行检测，胰岛素正常范围为1.3～17.5μU/ml。 医院： 科： 室 胰岛素诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 版本： 执行日期： 共 3 页 第 3 页 8．参考值 胰岛素正常范围为1.3～17.5μU/ml。