使用气相色谱、气相色谱-质谱和高效薄层色谱.pdfVIP

使用气相色谱、气相色谱-质谱和高效薄层色谱 联合对半枝莲叶片内源激素成分的研究 郭友嘉 任 清 何友钊 （中国科学院福建物质结构研究所，福州350002 （福建林学院，南平，353001） 植物体中的内源激素是调节植物生命活动的极 提取，提取液经减压浓缩至干，用95％甲醇溶解和定 微量存在的一种物质。过去采用生物方法鉴定这种 容成5ml，即得细胞分裂素提取液。 物质只能测得其总活性，近年来应用色谱和色－质谱 细胞分裂素提取液用制备薄层预分离时，取1ml 方法可把它们分离鉴定和定量测定（? 1－ 细胞分裂素提取液在202Ocm的HPTLP上以带状 半枝莲是一种春夏极易繁殖的花草，扦插易生 点样，点样带宽约4mm。用正丁醇：异丙醇：氮水： 根，萌芽力极强，它是提取和研究植物内源激素很有 水＝2：8：1：1的混合液为展开剂进行展开，当展 经济价值的方便资源。本文用常规方法2对半枝莲 距约达16c时取出薄板置于空气中晾干，在紫外灯 的植株叶片和扦插叶片中的内源激素进行提取，借 254nm）照射下被分离成前后沿比移值分别为 助气相色谱(GC)、色－质谱（GC/MS）和高效薄层色谱 0.81-0.74和0.63-0.61的两斑层（如图1 刮取 HPTLC）联合对提取液中内源激素进行了分离鉴定 斑层用95％乙醇提取，提取液经衍生供GC、GC/MS 和定量测定。实验结果对指导林业生产具有一定的 分析和直接供HPTLC分析。 理论和实际意义。 实验方法 （一）仪器和试剂 岛津GC-9AM气相色谱仪／C-R3A；Finnigan 8230色-质联用仪；CS-930薄层扫描仪／DR-2微机／ ATTD紫外检测仪。高效荧光硅胶板GF254ㄇ青岛海洋 图1细胞分裂素提取液制备薄层分离谱图 化工厂）。标样腺嘌吟(A)、双氢玉米素(DHZ)及玉米 （四）细胞分裂素提取液的GC、GC/MS分离鉴定 素(Z)为国产试剂。双（三甲基硅烷）乙酰胺（BSA）为 1.GCGC/MS样品的衍生制备 定量吸取细胞 E.MERCK产品。 分裂素的标准溶液或试样溶液0.5－? 1ml，注入带螺 （二）半枝莲植物样品的培植和采集 旋盖的小玻璃瓶中并于红外灯下烘干，加入100l的 春季3-4月播种，5－? 6月株高1520cm。植株 CH2Cl2后再烘干进一步去水，加入20l的无水吡啶 叶片样品摘自植株。扦插叶片样品系剪下植株上松 和50l的BSA.90恒温反应4小时，以供GC和 针状叶片扦插于泥土中培植10－?15天，生根后第 GC/MS分析。 2530天叶片成长达到肥大即可采集。 2.色谱操作条件 在GC-9AM上采用5S- （三）半枝莲叶片中细胞分裂激素的提取和预分 30/Shimalite W6080目）装填不锈钢填充柱（3m 离 3mm 程序升温的起始温度180 保持1min，以 半枝莲叶片中的细胞分裂激素是参照文献报道 5 min速度升至285再保持1min。用FID作检 的常规方法提取的（?2） 鲜重半枝莲植株和扦插叶片测器，检测和汽化温度均为300。N2作载气，流速 各100克，分别用95％乙醇重复浸提三次，提取液减 50ml/min。 压浓缩后用石油醚萃取除尽脂类物。水层用盐酸调 3.色-质谱操作条件 在GC/MS上采用25m长 节pH为9，用乙酸乙脂萃取三次后抛去。水相通过阳 的SE-54玻璃毛细管柱，用N2作载气，流速11.5m1/ 离子交换树脂柱，用3mol/氨水洗脱，洗脱液减压 min，分流比2 9，程序升温的起始温度