超临界萃取后紫草籽提取液抗氧化作用研究.pdfVIP

2004年全嗣生物技术学术研讨会论文集 研究论文综述 超临界萃取后紫草籽提取液抗氧化作用研究 昊海民陆领倩袁勤生 (华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，应用生物学系，上海200237) 摘要l用DPPH·法和还原能力研究了不同溶剂对超临界萃取后紫草籽粗提物的抗氧化活性， 并考察粗提物抗氧化活性物质的热稳定性．结果表明，95％乙醇粗提液对DPPH·的清除率最大， 有良好的热稳定性． 关t词sDPPH·法，还原能力，紫草籽，抗氧化剂 自由基可与生物体内的许多物质如脂肪酸、蛋白质等起作用，造成细胞结构与功能的破坏，引起机 体与组织损伤Ill。有关抗氧化剂清除自由基的研究得到普遍关注。然而合成的抗氧化剂往往有毒副作用， 人们正在试图开发和利用各种天然抗氧化剂。 二苯代苦味酰基自由基DPPH·分析法是一种筛选自由基清除荆、评价外源抗氧化剂和植物抗氧化能 力的一种快速、灵敏、简便的方法[21。其分析原理为DPPH·为一种稳定的自由基，乙醇溶液为深紫色， 而吸光度变小程度与自由基被清除程度成线性关系。因此，可用来检测自由基的消除情况，从而评价某 物质的抗氧化能力。其能力用清除率表示，清除率越大，抗氧化能力越强。 紫草作为我国传统中药，具有活血、抗病毒、解毒和抗菌作用。紫草种籽油也有重要的药用价值， 组成其种籽油的脂肪酸以亚油酸和亚麻酸为主131。紫草种籽油可通过超临界萃取技术获得。超临界萃取 后紫草籽为土色粉末，若废弃不仅造成资源浪费，还会对环境造成负担。据研究，超临界萃取后紫草籽 水溶液测出有超氧化物岐化酶SOD和过氧化氢酶等抗氧化酶的活性，本实验室已成功分离纯化出高纯 度的SOD。本研究课题是在东北地区人工种植紫草的籽经超临界萃取之后，对其有机溶剂租提液进行 抗氧化活性研究，可为紫草籽的综合利用提供一定的实验依据。 ●’ 1材料与方法 1．1实验材科与仪器 紫草籽为东北产，超临界萃取籽油后备用。 等试剂为国产分析纯；茶多酚为市售，上海智达科技有限公司生产。 紫外可见分光光度计(WFZ UV-2100)，上海合利仪器有限公司。离心沉淀机，上海医用分析仪器 厂。 1．2试验方法 1．2．1紫草籽抗氧化物质的提取 研究论文综述 2004年全国生物技术学术研讨会论文集 提取，离心，合并上清液备用。 1．2．2 DPPH·法抗氧化活性的测定 参照Larrauri[41和Ypkozavel51方法进行。向3．5ml 液及溶剂使总体积达到4ml。混匀30分钟后在517nm处测吸光度值，平行测试三次，计算清除效率。 并将抗坏血酸和茶多酚分别配制成不同浓度的溶液，按上述方法测定吸光度值，计算清除效率。 DPPH·清除效率=【AO．(A1．A2)】／A0 式中A0：3．5mL DPPH·溶液十0．5mL溶剂的吸光度；A1：3．5mLDPPH·溶液十0．5ml样品溶液的吸 光度：A2：3．SmL溶剂十0．5mL样品溶液的吸光度。 1．2．3还原能力的测定【6】 向lml样品中加入20mmol／L 2．5mL；混匀， pH6．6的磷酸缓冲液2．5mL，109／L的K3Fe(CN)6 50C保温20min后加入2．5mL 1009／L的三氯乙酸、2．SmL蒸馏水、0．5mL lg／L的FeC13，测700nm处吸 光度值。 1．2．4抗氧化活性的热稳定性 稀释5倍，按1．2．2方法测清除DPPH·能力。 2结果与讨论 2．1三种涪剂浸提液体积和清除DPPH·能力比较 紫草籽粉末分别经95％7,醇、乙酸乙酯和丙酮提取后，得到的上清液体积和清除DPPH．能力如表1。 —— 裹1三种溶剂浸挺藏体积和清除DPPH·能力比较 由此可见，虽然95％7,醇提取液体积最少。但其清除DP