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832 第五届博士生学术年会论文集 金属硫蛋白印迹聚合物研究 蔡震峰 任凤莲 司士辉 宋 鸽 中南大学化学化工学院，湖南省长沙市，410083 摘要金属硫蛋白是一类低分子量、能结合大量金属离子、富含半胱氨酸的蛋白质。采 用红外谱图考察了金属硫蛋白与丙烯酸的结合，研究了本体聚合法制备金属硫蛋白印迹聚合 物的影响因素，包括功能单体、交联剂、光引发剂对聚合物吸附量的影响，找到了最佳的聚合条 件，通过扫描电镜观察了印迹聚合物的表观形态。 关键词 金属硫蛋白 本体聚合法 印迹聚合物 吸附量 刖菁 金属硫蛋白。由于它具有低分子量、高巯基含量，能大量结合重金属离子等特点，因此称为金属硫蛋白 些方法在一定程度上都有缺陷。 分子印迹技术(molecularimprinting 位点聚合物的技术。因其具有类似于天然识别元素的高亲和性和高选择性，并且制备简单、稳定性好， 近些年来受到人们越来越多的关注。以往比较成熟的印迹研究主要集中在一些构象简单的小分子。对 于大分子，尤其是水溶性的生物大分子，因存在着体积大、结构复杂、可结合位点多等因素，常规的印迹 研究一直比较困难。 国内外对蛋白质的分子印迹技术研究最多的集中在牛血红蛋白。有关金属硫蛋白的分子印迹聚合物 的研究，由于金属硫蛋白价格非常昂贵以及其结构的特殊性，现在还没有见到相关报道。本文通过红外谱 图考察了金属硫蛋白与丙烯酸的结合；采用本体聚合法制备金属硫蛋白印迹聚合物，研究了功能单体、交 联剂、光引发剂对聚合物吸附量的影响，找到了最佳的聚合条件；通过扫描电镜观察了聚合物的表观形态。 这为进一步研究金属硫蛋白印迹聚合物的印迹机理和将其应用于金属硫蛋白的分离纯化奠定了基础。 一、材料与实验方法 (一)材料 金属硫蛋白(MT，湖南麓谷生物技术有限公司)；丙烯酸(AA，分析纯，天津市化学试剂三厂)；乙二 醇二甲基丙烯酸酯(EDGMA，工业纯，日本大内新兴化工公司)；偶氮二异丁腈(AIBN，分析纯，成都市 科龙化工试剂厂)；氯仿(AR，成都市金山化工试剂厂)。 紫外一可见分光光度计(UV一250LPC，日本)；高速冷冻离心机(CR一21GHimac)；FT—IR红外光谱 仪(Nicolet，美国)；扫描电镜(JSM-6360LV，日本)。 化学与化工 833 (二)实验方法 1．金属硫蛋白印迹聚合物的制备 将模板分子金属硫蛋白和AA，加入到装有氯仿的反应瓶中，超声溶解，放置过夜，使模板分子与功能 中，紫外灯下照射24h，使聚合完全。产物为块状固体，取出后粉碎、研磨、筛分，得到粒径为75}tm的颗粒。 然后，用去离子水反复漂洗、离心沉降以除去其中的细小粉末以及印迹分子。得到的聚合物再用含 外可见分光光度计在波长412nm处测其吸光度，直至检测不到金属硫蛋白的特征吸收为止。用无水乙醇 于索氏提取器中抽提24h，以除去少量未反应的有机物，并用去离子水将聚合物洗至中性后真空抽干。 2．金属硫蛋白的测定方法 取金属硫蛋白溶液200／-L，采用巯基检测法，于紫外一可见分光光度计412nm处测定光吸收A，溶 液中MT的浓度尺可以由下面简化公式计算得到。 一生妄芸 (1)() R一兰罂 ZU 3．聚合物的吸附量检测 将0．10009的聚合物颗粒放人金属硫蛋白溶液中，在室温下匀速摇动24h后，取出置于离心管中以 吸附后的金属硫蛋白浓度，由下面的公式(2)计算平衡吸附量。 Q一坠掣 (2) yy 为金属硫蛋白溶液体积(mL)，W为吸附剂的质量(g)。 二、结果与讨论 一、拿口木司p1}匕 (一)红外谱图分析 为了证实金属硫蛋白和单体丙烯酸在三氯甲烷