细胞工程-第14章-mdf题稿.ppt

第14 章植物胚胎培养 植物胚胎培养（Embryo Culture） 概念: 指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培养，使其发育成完整植物的技术。 包括胚培养（成熟胚培养、幼胚培养）、胚珠培养、子房培养、胚乳培养、试管受精等类型。 1904年Hanning最早成功培养萝卜和辣根的胚。 主要内容 14.1 胚培养 14.2 子房培养 14.3 被子植物胚乳培养 重点：胚培养 难点：胚乳类型： 14.1 胚培养 胚培养的类型： 分为成熟胚培养和幼胚培养两种。 14.1.1 成熟胚(mature embryo)培养 将子叶期以后的胚从母体上分离出来，放在无菌的人工环境条件下使其进一步生长发育形成幼苗的技术。 成熟胚为子叶期以后的胚，其在简单的培养基上即可萌发生长。对营养条件要求不严格。 主要用来繁殖不易萌发植物，或研究胚和胚乳及子叶的关系等。 成熟胚培养的程序 成熟的种子先用75%酒精表面消毒数秒到数分钟（视具体材料而定）； 0.1%升汞消毒5-15分钟； 无菌水清洗3-4次； 无菌浸种数小时至数日（视具体材料而）； 无菌条件下解剖种子，分离出胚； 胚用0.1%升汞消毒数秒至1分钟，再用无菌水清洗3-4次，无菌滤纸吸干水分后接种； 常规培养。 台湾红豆杉成熟胚培养 牡丹成熟胚的离体培养 14.1.2 幼胚(immature embryo)培养 将子叶期以前的具胚结构的幼小胚从母体上分离出来，放在无菌的人工环境条件下使其进一步生长发育形成幼苗的技术。 对发育早期的胚进行培养。培养技术和条件要求较高。 幼胚培养的操作程序 取授粉后未成熟的种子，先用75%酒精表面消毒数秒到数分钟（视具体材料而定）； 0.1%升汞消毒5-15分钟； 无菌水清洗3-4次； 无菌条件下解剖种子，分离出幼胚； 幼胚用0.1%升汞消毒数秒至1分钟，再用无菌水清洗3-4次，无菌滤纸吸干水分后接种于培养基； 附注：值得注意的是切取幼胚一般在高倍解剖镜下进行，操作时要特别细心，尽量取出完整的胚。 幼胚培养中的生长方式 (1)胚性发育 幼胚在培养基上继续发育为成熟胚后，再按照种子萌发途径成苗。 (2)早熟萌发 幼胚在培养基上不再继续发育为成熟胚，而是迅速萌发成苗。 (3)愈伤组织分化 幼胚在培养基上多形成胚性愈伤，再分化成苗。 14.1.3 胚培养的意义 ◆ 克服远缘杂交中杂种胚的败育 ◆ 成熟胚培养用于快速繁殖 ◆ 胚培养物作为转基因受体材料 ◆ 理论研究领域（器官发生、胚乳的作用、胚胎切割？） 14.2 子房培养（ovary culture） 子房培养：将子房从母体植株上摘下放在无菌的人工环境条件下，使其进一步生长发育形成幼苗的技术。 胚珠培养: 在人工控制的条件下，对胚珠进行离体培养使其生长发育形成幼苗的技术。 子房简介 子房是被子植物生长种子的器官，位于花的雌蕊下面，一般略为膨大。 子房由子房壁和胚珠组成。当传粉受精后，子房发育成果实。 胚珠受精后可以发育为种子。 子房壁最后发育成果皮，包裹种子，有的种类形成果肉，如桃、苹果等。 子房结构 子房培养步骤 适宜时间摘取子房； 70%酒精表面消毒30S； 5%次氯酸钠液中灭菌10分钟； 无菌水冲洗数次； 无菌条件下取出子房或胚珠； 接种于固体培养基； 子房培养注意 选用适宜时期的材料，胚囊成熟时期的子房最好。 选用适宜的培养基。 选用适宜的接种方式。 14.3 被子植物胚乳培养endosperm culture of plants 被子植物的胚乳，由两个极核和一个精细胞融合发育而成，染色体倍性为三倍体。 裸子植物的胚乳由大孢子直接分裂发育而成，染色体倍性为单倍体。 据细胞分化的特点，可将胚乳分为以下3种类型： 核型胚乳 细胞型胚乳 沼生目型胚乳 核型胚乳 胚乳的早期发育有一游离核时期。游离核分裂的次数则随植物种类而异。 细胞型胚乳： 不存在游离核时期，初生胚乳核及其后继的细胞分裂，有规则地形成细胞壁。 在核分裂后，随即伴随细胞质分隔和细胞壁的形成。以后进行的分裂全属细胞分裂，形成胚乳细胞，无游离核时期。 沼生目型胚乳 初生胚乳核移到合点端后分裂，形成一个合点端小室和一个珠孔端大室。珠孔端核再行游离核分裂，后期才形成细胞壁；合点端的核不分裂，或只行几次游离核分裂 沼生目型胚乳 14.3.2 影响胚乳培养的因素 胚乳发育时期（确定最佳培养时间） 培养条件（较高的生长素和酸碱度等） 胚乳培养的应用（意义）： 获得三倍体植株，用于育种。三倍体植株具有营养体大，无籽等特点。如无籽西瓜。 胚乳培养也会产生较多的混倍体，影响育种利用。但可用于染色体工程研究。 研究胚乳细胞全能性； 研究离体条件下的胚乳与胚的关系。 思考题： 1、为什么幼胚培养比成熟胚培养要求的培养