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第八章 酶免疫技术 教学目的要求： 1.掌握酶和酶作用的底物、酶标记的抗体或抗原；熟练掌握固相载体。 2.熟练掌握酶免疫技术的分类 3.熟练掌握酶联免疫吸附试验的方法类型及原理 4.掌握酶免疫测定的应用 敏感性高于HRP,但不易获得高纯度的制品、稳定性差，价格贵 酶蛋白与抗原或抗体结合形成酶标记物。 未与抗原（抗体）结合的标记抗体（抗原），称为游离标记物。 与抗原（抗体）结合的标记抗体（抗原），称为结合标记物。 因此，不需对反应液中结合和游离的酶标记物进行分离，直接测定反应系统中总酶活性的变化即可推算出被测样品中抗原的含量。 酶标二抗是针对一类免疫球蛋白(如抗人IgG），因此该法只需要变换固相抗原，即可用一种酶标二抗测各种与抗原相应的抗体，具有更广的通用性 试剂盒 （图为瑞士HAMILTON FAME24/20全自动酶免分析仪） 第四节 酶免疫测定的应用 1．病原体及其抗体测定 广泛应用于传染病的诊断。 2．蛋白质测定 各种免疫球蛋白、补体组分、肿瘤标志物各种血浆蛋白质、同工酶等。 3．非肽类激素测定 如T3、T4、雌激素、绒毛膜促性腺激素、黄体素、胰岛素、皮质醇、促甲状腺素等。 4．药物和毒品测定 如地高辛、苯巴比妥、庆大霉素、吗啡等。 练 习 1.用于标记的HRP的RZ值应该大于 A.2.4 B.3.0 C.1.5 D.3.5 E.5.0 1.用于标记的HRP的RZ值应该大于B A.2.4 B.3.0 C.1.5 D.3.5 E.5.0 2.RZ表示 A酶活性 B.催化效率 C.标记率 D.酶纯度 E效价 2.RZ表示D A.酶活性 B.催化效率 C.标记率 D.酶纯度 E.效价 3.HRP与底物TMB反应后的测定波长为 A.278mm B.450mm C.403mm D.495mm E.492mm 3.HRP与底物TMB反应后的测定波长为B A.278mm B.460mm C.403mm D.495mm E.492mm 5.HRP与TMB反应后，加H2SO4终止反应前呈 A.蓝色 B.橙黄色 C.棕黄色 D.黄色 E.紫色 5.HRP与TMB反应后，加H2SO4终止反应前呈D A.蓝色 B.橙黄色 C.棕黄色 D.黄色 E.紫色 6.辣根过氧化物酶（HRP）的受氢底物为 A.OPD B.TMB C.DAB D.H2O2 E.Eu 6.辣根过氧化物酶（HRP）的受氢底物为D A.OPD B.TMB C.DAB D.H2O2 E.Eu 7.ELISA常用的固相材料为 A.NC膜 B.聚苯乙烯 C.磁性颗粒 D.尼龙膜 E.凝胶 7.ELISA常用的固相材料为B A.NC膜 B.聚苯乙烯 C.磁性颗粒 D.尼龙膜 E.凝胶 8.目前国内ELISA常用的酶是 A.HRP B.AP C.β-Gal D.OPD E.TMB 8.目前国内ELISA常用的酶是A A.HRP B.AP C.β-Gal D.OPD E.TMB 9.何种ELISA方法其酶标二抗具有通用特性 A. 双抗体夹心 B.一步法 C.捕获法 D.竞争法 E.间接法 9.何种ELISA方法其酶标二抗具有通用特性E A. 双抗体夹心 B.一步法 C.捕获法 D.竞争法 E.间接法 10.间接ELISA可用于检测 A.AFP B.胰岛素 C.HIV抗体 D.吗啡 E.HBsAg 10.间接ELISA可用于检测C A.AFP B.胰岛素 C.HIV抗体 D.吗啡 E.HBsAg 11.捕获法测定病原体抗体的类别是 A.IgM B. IgG C. IgA D. IgD E. IgE 11.捕获法测定病原体抗体的类别是A A.IgM B. IgG C. IgA D. IgD E. IgE 12.目前通用标记HRP的实验方法为 A.戊二醛交联 B.过碘酸钠氧化法 C.琥珀酸酐法 D.混合酸酐法 E.碳化二亚胺法 12.目前通用标记HRP的实验方法为B A.戊二醛交联 B.过碘酸钠氧化法 C.琥珀酸酐法 D.混合酸酐法 E.碳化二亚胺法 （+） （-） E E E E E E E E E 双抗体夹心法测抗原 2.双位点一步法检测抗原 即在双抗体夹心法基础上使用针对抗原分子上两个不同表位的单克隆抗体，分别作为固相抗体和酶标抗体。测定时将待检标本和酶标抗体同时加入进行反应，两种抗体互不干扰，经一次温育和洗涤后，即可加入底物进行显色测定。 E E E 底物 固相抗体 标本（含抗原） 酶标抗体 双位点一步法检测抗原 在包被时使用一种单抗，酶标记时使用一种单抗 E E E E （+） E E （-） 双位点一步法测抗原 如果待检标本中抗原浓度过高， 容易形成“钩状效应（hook effect）”。钩状效应严重时，可出现假阴性结果