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第十章 催化水解反应的金属酶 第一节 概 述 一、水解酶 水解酶是六大酶类之中研究得最多并应用最广泛的一类，其中有不少水解酶的活性与金属离子有关。表8-1列举了某些。金属离子激活酶是指必须加入金属离子才具有活力的酶。 表8-1 某些水解金属酶和金属离子激活酶 酶 催化反应 金属离子 羧肽酶 C-末端肽残基水解 Zn2+ 亮氨酸氨肽酶 亮氨酸N-末端肽残基水解 Zn2+ 二肽酶 二肽水解 Zn2+ 中性蛋白酶 肽水解 Zn2+, Ca2+ 胶原酶 胶原水解 Zn2+ 磷脂酶C 磷脂水解 Zn2+ Β-内酰胺酶Ⅱ Β-内酰胺环水解 Zn2+ 嗜热菌蛋白酶 肽水解 Zn2+, Ca2+ 碱性磷酸酯酶 磷酸酯水解 Zn2+ 碳酸酐酶 CO2水合 Zn2+ α-淀粉酶 葡萄糖苷、糖苷水解 Zn2+, Ca2+ 磷脂酶A 磷脂水解 Ca2+ 无机焦磷酸酶 焦磷酸→正磷酸 Mg2+ 氨肽酶 N-末端肽残基水解 Mg2+, Mn2+ ATP酶 ATP水解 Mg2+ Na+, K+-ATP酶 ATP水解与阳离子转运 Na+, K+ Ca2+-ATP酶 ATP水解与阳离子转运 Ca2+ 水解酶根据水解键的类型分为酯酶、糖苷酶、肽酶等六个亚类。这里只就本章内容涉及较多的肽酶和酯酶作一些简要说明。 蛋白质是高分子物质，不能透过细胞膜，必须水解成小分子才能被肠吸收。蛋白质的水解作用要由各种肽酶催化才能进行。肽酶催化蛋白质的肽键水解。 根据作用方式，肽酶又分为：肽链端解酶和肽链内切酶。羧肽酶和氨肽酶都是肽链端解酶，它们分别从肽链游离的羧基末端和游离的氨基末端切下氨基酸。肽链内切酶通常称为蛋白酶，切断蛋白质分子内部的肽键使之变成小分子多肽，如嗜热菌蛋白酶。 RCOO-R′ + H2O →RCOOH + R′OH 如脂肪酶、磷脂酶。此外，磷酸酯酶则催化磷酸酯键的水解： 磷酸酯酶又分为磷酸单酯酶（如碱性磷酸酯酶）和磷酸二酯酶（如磷脂酶C）。 水解金属酶之中很多都与Zn2+有关，其次是Ca2+、Mg2+，还有少数酶含有Mn2+。由于水解过程不发生电子转移，所以金属离子的氧化钛在催化过程中不变化。 本章主要介绍目前研究得比较多的含Zn2+的羧肽酶A和碳酸酐酶，此外还适当介绍其它水解金属酶。 二、水解金属酶研究中的过渡金属离子探针 由于金属酶中存在某种过渡金属离子，因此，是光电子能谱、穆斯堡尔谱、d-d电子光谱等多种用于研究过渡金属化学的物理检测技术能在金属酶研究中广泛应用。Zn2+、Ca2+和Mg2+等离子不具有未充满电子的d轨道，因此，含有Zn2+、Ca2+和Mg2+等离子的金属酶研究就难以应用上述检测技术获得有用的信息。为了深入研究金属酶的性质，通常采用适当的其它过渡金属离子，以取得必要的信息。一般采用Co2+代替Zn2+，用Mn2+代替Mg2+。某些非过渡金属离子也作为探针使用，如Tl+代替K+的NMR探针。 为了成功地使用一个探针金属离子，必须遵照同晶置换的原则，即探针离子在酶分子中占据原有金属离子所在的同一位置。还要考虑电子构型、离子半径、配位几何构型等因素。其中很关键的问题是能否继续保持酶分子的生物活性。如果能够保持生物活性，则可以推测探针金属离子很可能是结合在原有金属离子的位置上。探针金属离子半径是一个必须考虑的重要条件。探针金属离子可能与不同于原有金属离子的配位基团结合，也可能形成不同的立体化学构型，因此，必须考虑对金属结合位置有利立体化学构型和配体的性质，去选择适当的探针金属离子。此外，金属配位键的强弱对于决定反应途径也很重要，而这种配位键的强度可随金属不同而变化。表8-2列举了已应用于生物体系的某些金属离子探针。 金属酶中的金属离子 探针金属离子 探针的 检测技术 离子 半径/nm 离子 半径/nm K+ 133 Tl+ 140 NMR、荧光 Mg2+ 65 Mn2+ 88 EPR Ca2+ 99 Mn2+ 88 EPR Zn2+ 69 Co2+ 72 d-d光谱 Zn2+的电子构型是d10，在电子光谱的可见区内没有吸收，因此在羧肽酶研究中采用Mn2+、Fe2+、Co2+、Ni2+、Cu2+、Cd2+、Pb2+、Hg2+等离子取代Zn2+。研究结果表明，Co2+取代的羧肽酶A对肽键水解具有很强的活性，Fe2+、Ni2+和Mn2+取代的羧肽酶A也对肽键水解有一定的活性。Co2+羧肽酶A的吸收光谱与经典的四面体配位的钴配合物很不同，而且摩尔消光系数很大，这是由于金属处于畸变四面体配位引起的，相应的园二色谱、磁园二色谱和低温EPR证明了这点。当没有X射线结晶分析数据时，这种方法常用来证明锌酶中Zn2+处于畸变四面体配位状态。