微生物药物产生菌菌种的保藏与质量控制精要.pptx

微生物药物产生菌的保藏和质量控制 刘红宇 2 微生物药物产生菌 微生物药物产生菌菌种管理 微生物药物产生菌菌种退化 微生物药物产生菌菌种保藏与质量控制 主要内容 微生物药物产生菌主要包括细菌、放线菌和真菌。被描述的微生物药物大约近两万种。 抗细菌:青霉素(Penicillin) P. notatum 降血脂:他汀类(Statins) P. brevicompactum, A. terreus, Monascus ruber 免疫抑制剂:环孢素(Cyclosporin A) Tolypocladium inflatum 抗真菌:棘白霉素类(Echinocandins) A. nidulans 一、微生物药物产生菌 实验室必须建立和保存其所有菌种的进出、收集、贮藏、确认试验以及销毁的记录，应有菌种管理的程序文件—2015中国药典 标准菌种的申购记录； 从标准菌株到工作菌株操作及记录； 菌种必须定期转种传代，并做纯度、特性等实验室所需关键指标的确认，并记录； 每支菌种都应注明其名称、标准号、接种日期、传代数； 菌种生长的培养基和培养条件； 菌种保藏的位置和条件； 其他需要的程序. 二、微生物药物产生菌菌种管理 二、微生物药物产生菌菌种管理 对 活 纯 性状稳定 微生物菌种实物管理 微生物菌种信息管理 保证菌种实物与信息的一致性 实物管理 信息管理 二、微生物药物产生菌菌种管理 菌种的来源 应来自认可的国内或国外菌种保藏机构的标准菌株， 使用与标准菌株所有相关特性等效的可以溯源的商业派生菌株。 -2015版中国药典 实物管理 信息管理 标准菌株的复苏、复壮或培养物的制备应按供应商提供的说明或按已验证的方法进行; 标准菌株如果经过确认试验证明已经老化、退化、变异、污染等或该菌株已无使用需要时，应及时灭菌销毁； 标准储备菌株应进行纯度和特性确认。 -2015版中国药典 二、微生物药物产生菌菌种管理 实物管理 信息管理 微生物药物产生菌菌种退化 微生物药物产生菌经过多次传代或长期保持菌种的一个或多个优良特性逐步减退或消失，称为微生物药物产生菌菌种的退化。 三、微生物药物产生菌菌种退化 在实际生产中，培养条件的变化也会导致菌种形态和生理上的变化，但是只要培养条件恢复正常，菌种原有性能就能恢复正常，因此培养条件引起的菌种变化是不能称为菌种退化的。 药用微生物产生菌菌种退化的鉴别 微生物药物产生菌菌种退化 微生物药物产生菌菌种退化主要表现在微生物的形态、生理特性及微生物药物生产能力等方面的变化： 1.细胞形态改变，产孢子能力下降。 2.培养特征异常，典型性状变为不典型。 3.对不良环境如低温、高温条件或噬菌体的侵染的抵抗力下降。 4.营养需求发生改变。 5.在生产上常见的退化现象有：微生物药物生产能力下降，生产的速度变慢。 三、微生物药物产生菌菌种退化 防止微生物药物产生菌菌种退化的方法 三、微生物药物产生菌菌种退化 1.控制转接传代次数 2.采用良好的培养条件 3.采用有效保藏方法 微生物药物产生菌菌种退化的原因 1.自发突变与回复突变 2.细胞本身自我调节和修复 3.环境条件的影响 适合的菌种保藏方法保证菌种的存活并防止菌种退化 冷冻干燥保藏法 -80度低温冷冻法 液氮超低温保藏法 四、微生物药物产生菌菌种质量控制-保藏方法 低温冷冻干燥、液氮贮存、超低温冷冻（低于-30℃）等方法保存； 低于-70℃或低温冷冻干燥方法可以延长菌种保存时间。 ---2015版 中国药典 四、微生物药物产生菌菌种质量控制-保藏方法 冷冻干燥保藏法 冷冻干燥保藏法是将菌种悬液在冻结状态下升华其中的水分,使得菌种处于干燥、低温和缺氧的条件下，从而得以长期保存的菌种保藏法。 原理：将含水量大的微生物菌种预先冷冻在真空条件下利用升华现象除去水分，细胞的生理活动趋于停止，从而能够长期维持生活状态。 适用范围：大多数细菌和放线菌。部分真菌和酵母菌。 优点：保存时间长、输送、贮存方便等优点。 缺点：冷冻干燥过程对细胞有损伤,操作步骤繁多，需要一定设备。 四、微生物药物产生菌菌种质量控制-保藏方法 冷冻干燥保藏法 四、微生物药物产生菌菌种质量控制-保藏方法 安瓿管准备 酸洗 水洗 蒸馏水洗 加标签及棉塞 灭菌 菌种 制备菌液 培养 （固体或液体） 分装安瓿管 安瓿管预冻 冷冻干燥开始 适当升温（促进干燥） 冻干结束 安瓿管封口 检查真空度 保护剂的选择与准备 分装 灭菌 保藏（低温避光） 冷冻干燥过程的影响因素 四、微生物药物产生菌菌种质量控制-保藏方法 冷冻干燥保藏法的影响因素 微生物菌种