基于CRISPRCas9技术的水稻千粒重基因tgw6突变体.PDFVIP

作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2016, 42(8): 1160?1167 / ISSN 0496-3490; CODEN TSHPA9 E-mail: xbzw@ 本研究由广东省公益研究与能力建设转型项目, 国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2011AA10A101)和国家现代农业 产业技术体系建设专项(CARS-01-12)资助。 This study was supported by Public Welfare Research and Capacity Building Transformation Funds in Guangdong , the National High Technology Research and Development Program of China (863 Program) (2011AA10A101), and the China Agricultural Research Sys- tem (CARS-01-12). * 通讯作者(Corresponding authors): 郭涛, E-mail: guoguot@, Tel: 020 陈志强, E-mail: chenlin@, Tel: 020 第一作者联系方式: E-mail: bcjfwang@, Tel: 020 Received(收稿日期): 2015-12-17; Accepted(接受日期): 2016-05-09; Published online(网络出版日期): 2016-05-23. URL: /kcms/detail/11.1809.S0853.008.html DOI: 10.3724/SP.J.1006.2016.01160 基于 CRISPR/Cas9技术的水稻千粒重基因 tgw6突变体的创建 王加峰 郑才敏 刘 维 罗文龙 王 慧 陈志强* 郭 涛* 华南农业大学国家植物航天育种工程技术研究中心, 广东广州 510642 摘 要: 利用 CRISPR/Cas9技术对调控水稻产量千粒重基因 TGW6定点编辑, 获得了一套有重要育种价值的 tgw6突 变体。设计了分别由 U3、U6a和 U6b启动子驱动、长 20 bp的 guide RNA (gRNA)靶点以靶向编辑 TGW6基因的外 显子 , 首先将这 3 个靶点一起组装到 pYLCRISPR/Cas9-MT(I)载体上 , 然后利用农杆菌介导侵染水稻材料 H447 (R819/玉针香//R819 的 BC3F6); 提取 T0代转基因植株的基因组 DNA 并对编辑位点附近的 DNA 片段进行 PCR 检测 及测序分析。结果表明, T0代材料中 tgw6的突变频率高达 90%, 其中纯合缺失突变率约占 51%。对 T1代纯合缺失突 变体的千粒重性状的调查分析结果表明, 部分 tgw6 的缺失突变能显著提高千粒重(大于 5%)。不同类型 tgw6 突变体 的成功创建不仅丰富了 tgw6的变异类型, 为水稻的高产稳产奠定了重要的材料基础, 还证实了 CRISPR/Cas9技术在 水稻基因工程育种中高效、易操作的特点。 关键词: 水稻; 基因编辑; CRISPR/Cas9; TGW6; 千粒重 Construction of tgw6 Mutants in Rice Based on CRISPR/Cas9 Technology WANG Jia-Feng, ZHENG Cai-Min, LIU Wei, LUO Wen-Long, WANG Hui, CHEN Zhi-Qiang*, and GUO Tao* National Engineering Research Center of Plant Space Breeding, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China Abstract: A set of tgw6 (Thousand-grain weight 6) mutants were constructed using CRISPR/Cas9 technology in this study. Three sites of 20 nt guide RNA (gRNA) targeted to the exon of TGW6 were designed and t