原生质体融合（副本）.pptVIP

植物体细胞杂交的几个重要进展 1960年 Kocking用酶法制备高等植物原生质体首次获得成功； 1971年 Takebe首次从离体烟草原生质体培养中获得再生完整植株； 1972年 Carlson首次获得粉蓝烟草和郎氏烟草的细胞杂种，这是第一个植物体细胞杂种； 1974年 Kao将聚乙二醇（PEG）诱导融合法应用于植物细胞融合并建立了相应的融合技术； 1978年 Melchers获得第一个属间体细胞杂种（番茄＋马铃薯）； 1981年 Zimmerman发明了电融合仪，并首次提出了电融合概念； 1987年 Schweiger建立了单对原生质体电融合技术程序。 实际操作：先把待融合的细胞或原生质体混合，取样置于100V/cm的高频交流电场中，在非均匀交流电场中形成项链状排列； 再用1~5V/cm直流电脉冲/微秒冲击细胞或原生质体的粘接点，细胞膜降解造成若干微孔，于是在膜之间形成通道，使细胞质得以交换；最后导致新的球状细胞的形成。 PEG融合所需试剂 融合液：pH 5.6 CaCl2 2H2O 8~10mmol KH2PO4 0.7mmol 甘露醇或山梨醇 0.5~1.0mol 诱导液：融合液＋PEG 20～45％ 稀释液： A液（g/100ml）pH6.0 B液 (g/100ml