徐辉分子生物学课件 Molecular Biology-徐辉-2012-03.pptVIP

* ‘‘People don’t just talk about the genome any more, they talk about the epigenome, something beyond the DNA.’’ PNAS April 25, 2006 * Allis and postdoctoral associate Sandra B. Hake PNAS April 25, 2006 * 乙酰化酶的发现（1995） 材料：四膜虫细胞 原因：四膜虫含有高度乙酰化的组蛋白，因此可能含有高浓度的HAT 方法：从大核（转录活跃）制备提取物，灌注有组蛋白的SDS中电泳，然后将胶泡在乙酰CoA（乙酰基用同位素标记）溶液中反应，反射自显影。 * 热变性 蛋白酶的抑制剂（N-乙基马来酰亚胺） BSA 无蛋白 感悟： 成功之道1：选择理想的研究材料 SV40 四膜虫 成功之道2：严格的对照 * * 两类组蛋白乙酰转移酶 HAT, type A，存在于细胞核，只识别部分乙酰化的组蛋白 HAT, type B，存在于细胞质，识别新合成的组蛋白 许多转录激活子的辅助因子coactivator（CBP/p300, TAFⅡ250）具有组蛋白乙酰基转移酶活性 Known Human proteins that possess histone acetyltransferase catalytic activity include: CREBBP, CDY1 , CDY2, CDYL1, CLOCK ELP3 , EP300 HAT1 KAT2A, KAT2B, KAT5 MYST1, MYST2, MYST3, MYST4 NCOA1, NCOA2, NCOA3, NCOAT TF3C4 * * 组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase，HDAC） 乙酰化激活转录，去乙酰化抑制转录 HDAC也是一个家族（四大类） * 组蛋白乙酰化与去乙酰化调控转录的模式 * 组蛋白甲基化（methylation） 组蛋白甲基转移酶（histone methyltransferases，HMTs） 催化1-3个甲基基团转移到组蛋白赖氨酸或精氨酸上，由辅酶s -腺苷蛋氨酸（ cofactor S-Adenosyl methionine）提供甲基。 Thomas Jenuwein Max Planck Institute, Germany * 组蛋白去甲基化酶（histone demethylases ，HDTs） Lysine Specific Demethylase 1 (LSD1). 2004 Jumonji domain-containing (JmjC) histone demethylases. 2005 * Type ofmodification Histone H3K4 H3K9 H3K14 H3K27 H3K79 H4K20 H2BK5 mono-methylation activation activation activation activation activation activation di-methylation repression repression activation tri-methylation activation repression repression activation, repression repression acetylation activation activation 甲基化的位置和效应 * Phosphorylation(磷酸化) Ubiquitylation (泛素化) Sumoylation(SUMO修饰) … 其它组蛋白修饰 各种组蛋白修饰决定了基因的活性 Activation Repression * Science. 2001;293:1074-80. 组蛋白密码理论 Distinct histone amino-terminal modifications can generate synergistic or antagonistic interaction affinities for chromatin-associated proteins, which in turn dictate dynamic transitions between transcriptionally active or transcriptionally silent chromatin states. The combinatorial nature of histone amino-terminal modifications t