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Dynabeads 链霉亲和素磁珠M-280 试剂盒检测病毒核酸
产品介绍:本公司 M-280 链霉亲和素磁珠是统一规格、超顺磁性的聚苯乙烯磁珠,其表面被覆单层链霉亲和素,链霉亲和素以共价方式黏附于磁珠表面。本公司提供的磁珠产品以悬浮液方式包装,每 ml 含 10mg-Dyna 磁珠,磁珠的贮存液是 pH=7.4 的磷酸盐缓冲液,其中含 0.1%BSA 和 0.02%叠氮钠——作为防腐剂。
本公司提供不同包装规格的产品:
No. 112.05 产品是 2ml 包装;
No. 112.06 产品是 10ml 包装;
No.602.10 是 100ml 包装。
产品介绍
链霉亲和素偶联的磁珠作为固相基质,可简便快捷、有效地与许多生物素化复合物结合,如:小分子,肽类,蛋白,抗体,糖类,凝集素,寡合核苷酸,DNA/RNA 等。
应用本公司的磁珠收集器(Dynal MPC) ,可高效率地收集磁珠、及随后实验操作靶分子。磁珠捕获、漂洗及检测等流程易于操作及体系优化。单层链霉亲和素以共价方式被覆在磁珠表面,确保较低的可忽略不计的失耦连率。磁珠上链霉亲和素的吸附无过多现象,能确保在您实验应用或检测中,不同批次试剂的变动小、结果重复性好
原理:
链酶亲和素磁珠
加入生物素标记分子
与生物素标记的分子结合
磁珠分离后,用于下游技术
磁珠分离
免疫磁珠法分离细胞原理示意图
M-280 磁珠的准备
使用前,需要洗去磁珠上防腐剂。应用磁珠收集器(Dynal MPC)可简化清洗程序。
1、轻轻摇晃装磁珠小瓶,悬浮磁珠,获得均匀一致的悬浮液。
2、根据需要,转移适当量磁珠悬浮液到备用管中。
3、将管子放在磁力架 1-2 分,在分离过程,不要将管子从磁力架上拿下来。
4、用移液器将管中上清移去(此时管置于磁力架上) ,避免移液器枪头触及管内壁(因磁珠附着于管内壁)
5、从磁力架上取下管子,根据您的特殊用途加入合适缓冲液,让缓冲液沿管内壁(磁珠积聚处)留下并轻轻悬浮,缓冲液用量与磁珠悬浮液等体积。
6、重复洗一次(步骤 3-5) ,然后放入适当体积缓冲液配制磁珠工作液。
使用说明
M-280 磁珠的准备(图解)
洗去防腐剂
弃掉上清液
沿管壁加入等量缓冲液
重复1次
备用液用液
轻轻摇晃
准备
1
磁力架
分离
Dynal 链霉亲和素磁珠液 M-280 不是去 RNA 酶的
7、向溶液 A 和溶液 B 加入 DEPC,使其终浓度达 0.1%,用力震荡。
8、室温放置 1 小时,高压灭菌。
9、用等体积溶液 A 洗磁珠两次,1-3 分钟
10、用等体积 B 洗磁珠一次。
11、用溶液 B 悬浮磁珠。
RNA 操作的准备
RNA 操作的准备(图解)
DEPC
DEPC
室温静置1h,高温灭菌
洗磁珠2次,1-3min
洗磁珠1次
悬浮磁珠
溶液 A::DEPC 处理的 0.1 M NaOH;DEPC 处理的 0.05 M NaCl
溶液 B:DEPC 处理的 0.1 M NaCI
Dynal链霉亲和素磁珠M-280为多种分子水平操作、 亲和提纯及各种生物检测提供了一个很好的载体。捕获靶分子有直接法或间接法。间接方法中,首先向样品中加入生物素化配体,其与特异性靶分子结合形成复合物。此复合物与用于捕获的磁珠共孵育。鉴于生物素与链霉亲和素的强亲和力、快速结合活力, 间接捕获法可应用于配体-靶分子结合动力低或亲和力弱的实验中, 以使非特异性结合最小化。此法还可应用于配体浓度低、配体-靶分子结合需要最适空间构象及真正液相动力学的实验中。
固定程序
1.将 0.1 μmol 荧光修饰核苷酸溶于 0.7 ml 无菌蒸馏水中(用 Aminolink 2?试剂可合成 5’ 氨基修饰寡
核核苷酸。 )
2. 加入 0.1 ml 的 1.0 M NaHCO3/Na2CO3 缓冲液,pH 值为 9.0.
3. 用一种酯类试剂 (Biotin-X-NHS-Ester) 让生物素贴附在氨基上。 将 10mg/ml 的 Biotin-X-NHS-Ester
溶液溶于二甲基甲酰氨中。取配好的此溶液 0.2 ml 加入反应混合物中。
4.室温放置 2 小时。
5. 用 NAP?-10 柱法去除痕量游离 Biotin-X-NHSEster。
6. 根据厂家说明书用反相 HPLC 法纯化生物素化寡核苷酸。
生物素化寡核苷酸引物(通过化学结合法完成 5’或 3’端氨修饰寡核苷酸的生物素化流程)
用 NAP?-10 柱法去除痕量游离 Biotin-X-NHSEster。
根据厂家说明书用反相 HPLC 法纯化生物素化寡核苷酸
PH=9
0.1 ml 的 1.0 M NaHCO3/Na2CO3 缓冲液
生物素化寡核苷酸引物
0.1umol荧光修饰核苷酸
0.7ml无菌蒸馏水
将 10mg/m
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