Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较.pdfVIP

第 7卷 第 1期 1999年 6月 中 国 实 验 动 物 学 报 Acta Laboratotium Animalis Scienlia Sinica Ⅷ ．7No．1 June，1999 Ⅱ型胶 原蛋 白与弗 氏完全佐 剂大 鼠关节 炎模 型的建立和 比较 林 红 贺永怀 黎 燕 陆应麟 沈倍奋 (中国协和医科 大学 中国医学科学院药用植物研究所，北京) 摘要 目的 对 Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ一A)和弗氏完全佐剂(A—A)大 鼠关节炎模型 在大体外观 和足部组织病理学切片等方面进行观察 比较 。方法 分别采用 Ⅱ型胶厚蛋 白和弗氏完全佐剂诱导 建立大 鼠关 节炎模型，利用排水法对大鼠足部体积进行测定 ，并将大鼠后足进行组织病理学切片观 察 。结果 从大体外观和足部病理切片上两种大 鼠模型均显示出有 明显的病变 ，但 c1I—A大 鼠 与 A—A大鼠比较 ，滑膜增生及软骨破坏等 继发性病变 特征更 为明显 ，关节炎持续时间也较长，更 接近于人 的类风湿性关节炎。结论 C1I—A大鼠模型与 A—A相 比是研究 P,A较为理想的动物模 型 关键词 类风湿性关节炎 Ⅱ型胶 原蛋 白大鼠关节炎 弗氏完全佐剂大 鼠关节炎 类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是 慢性多关节炎症为主要表现的全身性 自身 免疫性疾病 ，病因和发病机制尚未完全清楚。在 RA中，滑膜的持续性增生和软骨及骨的破 坏是其重要的病理学特征。RA的动物模型有多种，其中较为经典的是弗氏完全佐剂诱导的 大鼠关节炎和 Ⅱ型胶原蛋白诱导的大鼠关节炎模型。本文将对这两种大鼠关节炎模型的大体 外观、足部肿胀程度以及组织病理学观察等方面进行 比较研究 ，以选择更为理想 的动物模 型 。 材料与方法 l 实验动物 Wistar大鼠，雌性 ，4—6周龄， 只 ，由军事医学科学院动物 中心提供。 2 主要试剂 牛源性 Ⅱ型胶原蛋 白(Cotage．Ⅱ，CⅡ，from bovine nasal蚓姗m)，酸可溶 性 ，美国 Sigma公司产品；弗氏不完全佐剂(Freund’s Ad{um t Incomplete，FIA)美国 Sigma公 司 产品；卡介苗(BCG)购于北京卫生部生物制品研究所。 3 大鼠关节炎的诱导方法 Ⅱ型胶原蛋白诱导的大鼠关节炎模型的建立 参照文献[1】的方法，将酸溶性 Ⅱ型胶原蛋 白(colagenⅡ，CⅡ)用弗 氏不完全佐剂配成 cⅡ浓度为 2．5mg／ml的乳剂，按每只大鼠 100tl乳 剂含c 1I 250pg，于左后足跖皮内注射致炎。佐剂性关节炎的诱导按照常规方法[2]：将卡介苗 (BCG)于 80。c灭活 lh，加人到弗氏不完全佐剂 中(终浓度 tO~ m1)，充分乳化混匀制成弗 氏完 全佐剂(FCA)，每只大鼠注射 t0％1；用注射 100td生理盐水／只的大鼠作为正常对照组。 * 军事医学科学院基础 医学研究所 2 中 国 实 验 动 物 学 报 第 7卷 4 大鼠关节炎足体积的测定方法 采用排水法测足部体积：在大鼠足部踝骨关节突出部位划一条线作为标记，用一特制量 筒，灌满水后，将大鼠足部插入，使水面与踝骨上的标记处于同一界面，另用一个烧杯接从量筒 侧 口排出的水，测量排出水的体积 ，即为所测大鼠足部的体积 ，每只足每次测量重复 5次。 5 大鼠足部病理切片制备 己醚麻醉引颈处死大鼠后，切取掌趾部，立 即放人缓 冲福尔马林溶液中固定 ，常规梯度 乙 醇脱水 ，石蜡包埋、切片，片厚约 3～5 1，}Ⅲ染色观察 结 果 1 注射诱导后大鼠的外观变化 随机将太 鼠分成 3组，每组 lO只 ，分别用于 Ⅱ型胶原蛋白诱导处理组 (cⅡ 一A)、弗氏完 全佐荆诱导处理组(A—A)和正常对照组(Controlj。CⅡ和 FCA注射诱导后第二天 ，大鼠注射 ‘ 足即有明显的肿胀 ，出现急性免疫反应。第 14～21d后，cⅡ诱导组大鼠对侧足出现红肿 ，至第 35～45d后 ，大鼠前足出现红肿，并有关节变形。而 A—A大鼠则 到注射后第 墙～25d左右才 出现对侧足的肿胀。在两种关节炎太 鼠中，cⅡ一A大鼠关节炎的持续时问较长 ，到 四个月后 肿胀仍较明显。A—A大 鼠至四个月后足部 的肿胀则逐渐消退 。如图 1～3。 囝 1 正常大 鼠注射后第 35天的外观图 国 2 A—A关节炎大鼠注射后第 35天 的外观图 第 1期 Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大 鼠关节炎模 型的建立和比较 3 图 3 CⅡ关节炎大 鼠注射后第 35天的外观图 2 CⅡ诱导关节炎的大鼠足体积改变 用排水法测量大 鼠足部体积，观察到注射后第 14—21天 CⅡ一A大 鼠后足体积有明显变 化，cⅡ一A大 鼠的左后足和右后足体积大于正