几种真菌DNA提取方法的比较.pdfVIP

中国虐亏c墨搪 2009，25(08)：62—64 Chinese Agricultural Science Buletin 几种真菌DNA提取方法的比较 吴发红，黄东益，黄小龙，周 鑫，程文杰 (海南大学农学院，海南儋州571737) 摘 要：通过3种内生真菌DNA提取方法的比较，即CTAB法、SDS法、改良的CTAB法，结果表明三种方 法都能得到 目的DNA，而且得率都较好，但改良的CTAB法效果最好，不仅DNA纯度高且质量也好。用 改良的CTAB法所提取的DNA作为模板，进行PCR扩增，得到了清晰的、单一的扩增普带，完全可用于 酶切、测序等后续实验。 关键词：内生；DNA提取；CTAB；SDS 中图分类号：$812 文献标识码：A Comparing Study on several M ethods for DNA Extraction from endophytic fungi Wu Fahong，Huang Dongyi，Huang Xiaolong，Zhou Xin，Cheng Wenjie (Academy ofAgriculture，Hainan University，Danzhou Hainan 57 1737) Abstract：In this study，three different methods were used to extract DNA from endophytic fungi：CTAB，SDS and the improved CTAB．Quality and quantity of the extracted DNA were compared for the there methods．The results showed that all of the there methods could obtain the DNA，but the improved CTAB could obtain the highest quantity of the purest fungal DNA．The purest DNA was amplified by PCR ．The clear and singal gel fragment showed that the extracted DNA could be used for the other biological experiments． Key words：endophytic，DNA extraction，CTAB，SDS 真菌的分类鉴定过去一般采用的是形态学方法， 主要按照真菌的形态、生理生化特点、抗原构造等特征 加以区分。但真菌种类众多、个体多态性明显，常会得 出假阳性或假阴性结果，因此鉴定结果不是很准确u 。 近年来，随着分子生物学的发展，其在真菌分类学中发 挥了越来越大的作用，rDNA序列分析被广泛使用。 要进行 DNA序列分析，就需要用PCR扩增特定的 DNA片段，而DNA提取则是这项工作的基础。因此 找出一种快速且得率高的方法就显得很重要。笔者通 过几种DNA提取方法的比较口一1，得到一种较好的提取 真菌DNA的方法。 1材料和方法 1．1菌株来源 该研究所使用的菌株是由海南大学农学院提供 1．2菌株的培养与收集 将真菌孢子接种到PDA平板上活化培养2—3天， 温度25℃，光照12L：12D。 两种方法收集菌丝：一种是当菌丝长满培养基表 面并未产孢时，直接从平板上刮取菌丝；另一种是从平 板上挑菌饼到液体PDA培养基中，28℃ 180 r／min震 荡培养5～7天，真空抽滤，收集干燥的菌丝。 1．3主要试剂 。 2xTaq PCR MasterMix和蛋白酶K购于上海天根 生物公司，CTAB，SDS，DNA—marker、GoldView购于上 海生工生物公司，引物1(ITS1：5’．TCCGTAGGTGAAC CTGCGG．3’)和引物2(ITS4：5-TCCTCCGC T．n GA TATGC．3’)由上海英骏生物技术有限公司合成。 第一作者简介：吴发红，女，1982年出生，安徽省池州市人，研究生。研究方向：分子生物学。通信地址：571737海南大学(儋州校区)农学院，E-mail： fafa-139@163。corn。 通讯作者：黄东益，男，1969年出生，云南宣威人，教授，研究方向：水稻、甘蔗等作物的分子标记育种与分子细胞遗传学，微生物学。通信地址： 571737海南大学(儋州校区)农学院，E-mail：hdongyi123@tom．corn 收稿日期：2009．02．18，修回日期：2009．3．3。 吴发红等：几种真菌DNA提取方法的比较 · 63 · 1．4 DNA提取方法 CTAB法