動物细胞培养生物反应器及专用微载体.pptVIP

动物细胞培养生物反应器及专用微载体 广州大学生命科学学院 柯德森 为什么要进行动物细胞培养? 动物细胞的特点、培养条件及存在问题 动物细胞培养方式 动物细胞培养的操作方式 动物细胞培养生物反应器 动物细胞反应器的控制 动物细胞培养专用微载体 内容提要 动物细胞培养 细胞培养是指离体细胞在无菌条件下分裂、生长 ，在整个培养过程中不出现分化，不再形成组织。 动物细胞培养的意义 动物细胞培养对生产生物工程产品,特别是功能蛋白质方面具有明显的优势: 1)同源性: 直接进行翻译后加工,蛋白质可直接折叠成正确的构象 翻译后修饰糖基化，与天然产品一致。 2)有利于产品的分离纯化:分泌胞外、纯化方便 动物细胞培养的意义 医药卫生领域 生物工程生物制药领域 羊水细胞培养 羊水细胞培养是培养羊水内脱落的胎儿细胞，做成染色体核型分析，用于诊断胎儿染色体病及胎儿畸形，是一种科学的、结果可靠的、安全的产前诊断法。 常用于生物工程及制药行业的动物细胞体系 W1-38：正常胚肺组织人二倍体 细胞系。 核型为2n=46。成纤维细胞， 能产生胶原，培养基用BME （Eagle’ Basal medium）。 10%小牛血清，pH7.2, 同工酶为G6PD B型。 倍增时间为24h， 有限寿命50代。 安全，用于制备疫苗。 MRC-5：从正常男性肺组织 中获得的人二倍体细胞系。 核型为2n=46。 属成纤维细胞。 培养基用加小牛血清。 同工酶G6PD B型。 有限寿命42～46代。增殖 速度较W1-38快，对不良 环境敏感性较W1-38低。 对人的病毒敏感。 用于生产疫苗。 BHK-21:从5只无性别的生长1天的地鼠幼鼠肾脏中分离的;成纤维样细胞,核型为2n=44;培养基为DMEM加7%胎牛血清。用于增殖病毒，包括多瘤病毒、口蹄疫病毒、狂犬病毒等并制作疫苗，现已用于工程细胞构建。 Vero：从正常成年非洲绿猴 肾脏分离的。 为贴壁依赖的成纤维细胞， 核型2n=60； 培养基为199培养基， 加5%胎牛血清；用于增殖病毒， 包括多瘤病毒、脊髓灰质炎、 狂犬病毒。 Namalwa：从肯尼亚患有淋巴瘤病 人获取，建成的人的类淋巴母细胞。2.8%的高倍体率，12～14条标记染 色体。单条X，无Y。培养基为RPMI 1640，添加7%胎牛血清。用于生产 α干扰素。 SP2/0-Ag14：通过融合的方法， 从有羊抗红细胞活性的BALB/c 小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞系 P3X63Ag8融合杂交瘤SP2/NL-Ag 亚克隆中分离获得， 能耐受8氮鸟嘌呤 20μg/ml但 在含HAT 选择培养基中不能存活。 通常用培养基为DMEM，添加10%胎 牛血清。用于生产单抗杂交瘤细胞 和抗体。 Sf-9 1983年从亲代IPLB—SF21AE 中克隆形成。亲代细胞从秋粘虫的 蛹卵组织中分离获得。它对苜宿尺 蠖核型多角体病毒和其它杆状病毒 高度敏感。 通常用的培养基为Grace培养基， 添加3.3g/L 水解乳蛋白和3.3g/L 酵母浸液, 10%胎牛血清。用于高 效表达外来蛋白制品。 动物细胞的生理特点 动物细胞有两种类型: 1）非贴壁依赖性细胞 (血液、淋巴组织、肿瘤组织） 2）贴壁依赖性细胞 （大多数动物细胞，包括非淋巴组织的细胞和许多异倍体细胞） 培养方法 1、贴壁培养 2、悬浮培养 3、固定化培养 贴壁培养:贴壁依赖性细胞在培养中要贴附于壁上才能迅速铺展,开始有丝分裂并迅速进入对数生长期,这种培养方式就叫贴壁培养.多数动物细胞的培养都采取这种方式. 动物细胞对周围环境十分 敏感: 对理化因素敏感，如： 渗透压、pH、离子浓度、剪切 力、微量元素等。 动物细胞对培养基要求高: 必需氨基酸、维生素、无机盐、 微量元素、葡萄糖、细胞生 长因子、贴壁因子等。 1、培养基组成：血清是目前细胞培养基中不可缺少的成分，向细胞提供生长所需要的激素、转移蛋白和其他营养成分，已成为细胞培养达到最优化和降低成本的主要障碍。 降低血清用量和采用无细胞培养基是目前研究的热点。 六大限制细胞生长的因素： 血清培养基的主要缺点及其原因： 血清中含有细胞生长必须的微量组分，但这些组分的成分及其作用至今未清楚，因此无法取代； 血清的存在是产物纯化的主要障碍； 血清是病毒污染及其他未知因素影响的主要来源，增加了细胞培养产品潜在的使用危险； 血清是培养基成本的主要部分； 血清同时也有生长抑制的作用； 血清使用使实验和生产过程标准化变得困难。 2、限制细胞生长的因素：