螺旋藻多糖对小鼠胸腺细胞增殖作用机制的探讨.docVIP

项 目 申 请 书 （基础医学院学生开放实验项目适用） 项目名称：螺旋藻多糖对小鼠胸腺细胞增殖作用机制的探讨 申 请 者：潘尚领 所在实验室：病生实验室/免疫实验室 电 话 申请日期：2007年7月 广西医科大学基础医学院 二ＯＯ七年制 一、简 表 研 究 项 目 项目名称 螺旋藻多糖对小鼠胸腺细胞增殖作用机制的探讨 项目类别 A.参与科研型 B.科技活动型 C.自选课题型 D.其他 B 项目经费(元) 2000 起始时间 2007年8月 完成时间 2007年12月 项 目 组 指导教师（1-3人，可含技术员） 姓名 性别 出生年月 专业技术职务 项目中分工 签名 潘尚领 男 1965.5 副教授 指导实验 唐深 男 1975.6 副教授 指导实验 学生（4-5人，教师与学生双选后补填） 姓名 性别 出生年月 专业年级班 项目中分工 签名 陈家庄 女 12 策划、组织、实施 付江萍 女 12 实施 王莹 女 12 实施 项目内容、创新点综述：（限300字） 近年来，有关植物多糖及糖类复合物的研究表明：多糖有特殊的生物活性。随着海洋药物的兴起，对海藻多糖的活性研究已成为目前药物的研究重点之一。螺旋藻是一类低等植物，属蓝藻门、颜藻科，又名蓝细菌，是地球上最早出现的光合生物。国内外大量科研实验证明：螺旋藻在降低胆固醇和血脂、抗癌、减肥、养胃护胃、治疗贫血及微量元素积极护肝等有积极作用。其中的一种多糖成分能够促进淋巴细胞的增殖，提高淋巴细胞的活性，增强人体免疫力，是一种值得研究的免疫调节剂。本项目拟探讨螺旋藻多糖对体外培养的小鼠胸腺细胞增殖作用的影响。 二、立论依据 （简要的项目依据及研究现状分析） 近年来，有关植物多糖及糖类复合物的研究表明：多糖有特殊的生物活性。随着海洋药物的兴起，对海藻多糖的活性研究已成为目前药物的研究重点。螺旋藻是一类低等植物，属蓝藻门、颜藻科，又名蓝细菌，是地球上最早出现的光合生物。国内外大量科研实验证明：螺旋藻在降低胆固醇和血脂、抗癌、减肥、养胃护胃、治疗贫血及微量元素积极护肝等有积极作用。其中的一种多糖成分能够促进淋巴细胞的增殖，提高淋巴细胞的活性，增强人体免疫力，是一种值得研究的免疫调节剂。 三、研究方案 1．研究内容 本实验将对用不同浓度（２５μg/ml，５０μg/ml，１００μg/ml，２００μg/ml）螺旋藻多糖和设置生理盐水对照组对淋巴细胞增殖作用机制其中的ＩＬ—２的表达进行探讨。 2．拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析 2.1 实验动物 ICR小鼠，雄性，6~8周龄，体重18~20克，４0只。 2.2 胸腺淋巴细胞的制备 小鼠颈椎脱臼法处死，无菌取胸腺经200目钢网过筛，将细胞悬浮于含10%新鲜小牛血清的RPMI1640完全培养液（含2mmol/L-谷氨酰胺，10mmol/L丙酮酸钠，1mmol/L巯基乙醇，临用前加入青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml）中，台盼蓝记数，活细胞＞95%，调整胸腺细胞浓度为４×10６/ml 2.3 淋巴细胞增殖反应　　ＭＴＴ法改进：９６孔细胞培养板，每孔加入４×10６／ml胸腺细胞悬液１００μl及不同浓度的螺旋多糖１００μl，于５％CO2，３７。Ｃ培养箱中培养７２h，培养结束前４h，每孔加入ＭＴＴ（５mg/ml）8μl,　培养结束时每孔吸去１５０μl上清，加入０．５Ｎ盐酸异丙醇１５０μl，于微量振荡器上轻轻震荡使蓝色结晶完全溶解，在酶标仪上测定ＯＤ５７０，每实验点设为三复孔。 2.4 白介素Ⅱ的测定　将制成小鼠×10６/ml浓度的单细胞悬液，在含有5%小牛血清1 640培养液中经37，5%CO2及饱和湿度条件下孵育48 h，离心收获上清待测。采用夹心ELISA方法测定小鼠IL-２的浓度。 可行性的分析：（１）立题新颖，属热门课题。 　　　　　　　（２）同学有着浓厚的兴趣，而且有一定的实验基础。 　　　　　　　（３）有十分有经验的指导老师。 （4）实验室具备本研究所需的仪器设备。实验方法成熟稳定。 3．研究目标(主要指理论成果) 螺旋藻多糖对淋巴细胞增殖有促进作用，其机制可能是通过提高ＩＬ—２的表达，刺激淋巴细胞的增殖。 四、研究工作 1．实验室已具备的实验条件 实验仪器:培养板 200目钢网过筛 CO2培养箱中 离心机 台盼蓝 2．需购买的实验材料（含试剂等） 螺旋藻多糖：配制成不同浓度（２５μg/ml，５０μg/ml，１００