芽孢杆菌P3的分离鉴定及其生长条件的试验研究(医专校报)芽孢杆菌P3的分离鉴定及其生长条件的试验研究(医专校报).docVIP

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2017-04-23 发布于贵州
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芽孢杆菌P3的分离鉴定及其生长条件的试验研究李帆，杨莹，查诚（安庆医药高等专科学校，安徽安庆 246003）摘要目的：从污水处理池的污泥中分离得到兼性厌氧的菌株，对其进行分类鉴定。方法：根据维诺格拉斯基柱法分离出几种纯菌株，选取其中生长较好的一株，经形态观察和生理生化实验以及16SrDNA测定，鉴定其分类地位。研究不同培养条件对该菌生长的影响。结果：获得一纯菌株P3，初步推测该菌为Bacillus sp.，经16SrDNA鉴定其为Bacillus sp.。其最适生长条件为：温度29℃，初始pH值7.0，盐度0.1%以及摇床(100r/min)培养。结论：经形态观察和生理生化实验推测P3菌的分类地位具有一定的准确性关键词芽孢杆菌；16SrDNA；鉴定　中图分类号：Q93－33 Isolation and Identification of Bacillus sp. Strain P3 and Optimum Conditions Li Fan, Yang Ying, Zha Cheng (Anqing Medical And Pharmaceutical College, Anqing 246003, China) Abstract: Objective: A strain which was isolated from sludges of fertilizer plant was identified and its optimum conditions was studied. Methods: Several strains were isolated with the method of Winogradsky column. The strain which outgrew others was identified according to morphological observation, biochemical and physiological test and 16SrDNA. Then it was cultivated on various conditions. Results: The strain named as P3 was identified as Bacillus sp.. The optimum conditions for the growth of the strain were: temperature 29℃,initial pH 7.0 and shaking at 100r/min. Conclusion: It was revealed by this study that morphological observation, biochemical and physiological Keywords: Bacillus sp.;16SrDNA; wastewater; identify —————————————————— 作者简介：李帆(1983－),女,硕士,研究方向:生物技术。 0 引言细菌基因提取鉴定的方法具有繁琐和费用高的缺点，而形态观察以及碳氮源实验和生理生化实验等初步鉴定方法操作简单，费用低，因此本试验从四方化工集团的污水处理池中采集污泥，根据维诺格拉斯基柱法[1]，分离得到一株纯菌株，通过对该菌的分类、生长特性进行了试验研究，然后和16SrDNA鉴定结果进行对比，旨在证明初步鉴定方法在细菌鉴定中具有一定的准确性。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验材料采自合肥市四方化工集团污水处理池中的污泥。 1.1.2 试剂生物素、烟酸由北京索莱宝科技有限公司生产的分析纯试剂，细菌通用引物[2]27F(5AGAGTTTGATCCTGGCTCAG3)、 1492R(5GGTTACCTTGTTACGACTT3)，以及上海生工的TaqDNA聚合酶、dNTP、MgC12其余均为国产分析纯。 1.1.3 仪器座式自动电热压力蒸汽灭菌器；电子天平；微量高速离心机；LRH-250A生化培养箱；ZHWY-2102C新型恒温震荡器；WFV UV-2100分光光度计； 1.1.4 培养基 ①分离培养基：氯化铵1.0g，碳酸氢钠1.0g，磷酸氢二钾0.2g，乙酸钠3g，七水硫酸镁0.2g，氯化钠0.5～2g，生长辅助因子(维生素B1,烟酸,对氨基苯甲酸,生物素)数毫克～数十毫克，蒸馏水1000ml，无机盐类溶液10ml，pH7.0。无机盐类溶液：六水氯化铁5mg，五水硫酸铜0.05mg，硼酸1mg，四水氯化锰0.05mg，七水硫酸锌1mg，六水硝酸钴0.5mg，蒸馏水1000ml。 ②生长培养基: 氯化钠0.5g，乙酸钠1g，硫酸镁