蛋白质与酶学教学 第七章 应用酶学.pptVIP

第七章 应用酶学;第一节 酶的分子修饰 通过各种方法使酶分子结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的过程，称为酶分子修饰。 酶分子经过修饰后，可以显著提高酶的使用范围和应用价值。例如可以提高酶活力，增加酶的稳定性，消除或降低酶的抗原性。;一、金属离子置换修饰 通过改变酶分子中所含的金属离子，使酶的特性和功能发生改变的方法称为金属离子置换修饰。简称离子置换法。 有些酶含有金属离子。而且金属离子往往是酶活性中心的组成部分，对酶的催化功能起着重要作用。例如： α—淀粉酶 —— Ca2+ 谷氨酸脱氢酶 ——Zn2+ 过氧化氢酶 ——Fe2+;若从酶分子结构中除去其所含的金属离子，酶往往会失活，若重新加入原有的金属离子，酶可以恢复原有活性，若加进不同的金属离子，则可使酶呈现不同的特性。有的可使酶活性降低，甚至失活；有的却可使酶的活力提高并增加酶的稳定性。;用于酶分子修饰的金属离子，往往是二价金属离子。例如：Ca2+，Mg2+，Mn2+，Zn2+，Co2+，Cu2+，Fe2+等。金属离子置换修饰法只适合于本来在结构中含有金属离子的酶。 例如，锌型蛋白酶的Zn2+除去，然后用Ca2+置换成钙型蛋白酶，则酶活力可提高20—30%。若将钙型蛋白酶制成结晶，则其酶活力比锌型蛋白酶结晶的酶活力提高2—3倍。;二、大分子结合修饰 利用水溶性大分子与酶结合，使酶的空间结构发生某些精细的改变，从而改变酶的特性与功能的方法称为大分子结合修饰法。简称为大分子结合法。 通常使用的水溶性大分子修饰剂有：右旋糖酐、聚乙二醇、肝素、蔗糖聚合物、聚氨基酸等。这些大分子在使用前一般需经过活化，然后在一定条件下与酶分子以共价键结合。对酶分子进行修饰。;操作时需根据所要求的分子比例控制好酶和修饰剂的浓度，并控制好温度、pH值和反应时间等修饰条件，以便获得理想的修饰效果。 大分子结合修饰是目前应用最广的酶分子修饰方法。经过此法修饰的酶可显著提高酶活力，增加稳定性或降低抗原性。;三、肽链有限水解修饰 利用肽链的有限水解，使酶的空间结构发生某些精细的改变，从而改变酶的特性和功能的方法，称为肽链有限水解修饰。 例如， 蛋白酶修饰 胰蛋白酶原不具酶活性————————具有活性 水解除去一个六肽 的胰蛋白酶 ; 胰蛋白酶修饰 天门冬氨酸酶——————————活力提高 羧基端切除一个10肽 4—5倍;四、酶蛋白侧链基团修饰 酶蛋白侧链基团就是指组成蛋白质的氨基酸残基上的功能团。如氨基、羧基、咪唑基、吲哚基、酚羟基、羟基、胍基、甲硫基等。 这些基团可组成各种副键，对于蛋白质空间结构的形成和稳定起着重要作用。如果这些功能基团发生改变，就会引起副键的改变，使空间结构发生某些改变，从而引起酶的特性和功能的改变。 酶蛋白侧链基团修饰一般采用化学手段，故属于化学修饰法。 ;(一)、氨基修饰剂 凡能使酶蛋白侧链上的氨基发生改变的化合物，称为氨基修饰剂。如二硝基氟苯、醋酸酐、琥珀酸酐、二硫化碳、亚硝酸等。 (二)、羧基修饰剂 可与酶蛋白侧链上的羧基反应的小分子化合物称为羧基修饰剂。如乙醇—盐酸试剂、水溶性的碳化二亚胺、异唑盐等。;(三)、胍基修饰剂 精氨酸含有胍基。可与二羰基化合物缩合生成稳定的杂环。 (四)、巯基修饰剂 蛋白质中的半胱氨酸残基侧链中含有巯基。巯基在许多酶中充当活性中心的催化基团，巯基可与另一个巯基形成二硫键，对维持酶的结构稳定性起着重要作用。;(五)、酚基修饰剂 蛋白质的酪氨酸残基上含有酚基。修饰酚基的主要方法有碘化法、硝化法和琥珀酰化法等。 (六)、分子内交联剂 用含有双功能的化合物，如二氨基丁烷、戊二醛、己二胺等，与酶分子内两个侧链基团反应，在分子内共价交联，可使酶分子空间构象更加稳定，从而也使酶的催化稳定性增加。 酶经侧链基团修饰后，对于酶的活性、稳定性或抗原性都有显著影响，往往可提高其使用价值。;五、 氨基酸置换修饰 若将肽链上的某一个氨基酸换成另一个氨基酸，则会引起酶蛋白空间构象的某些改变，从而改变酶的某些特性和功能，这种修饰方法，称为氨基酸置换修饰。 蛋白质工程又被称为第二代遗传工程。是指通过改造与蛋白质相对应的基因中的碱基排列次序，或设计合成新的基因，将它克隆到寄主细胞中，通过基因表达而获得具有新的特性的蛋白质的技术过程。; 蛋白质工程主要步骤如下： 1．新蛋白质结构的设计 2．突变基因的核苷酸序列的确定 3．突变基因的获得 4．新蛋白质的产生;六、物理修饰 通过各种物理方法，使酶分子的空间构象发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的方法称为物理修饰。 物理修饰的特点在于不改变酶的组分和基团，酶分子