宋存江《生物技术概论》5.酶工程.pptVIP

; 酶工程  引 言;酶工程的发展趋势 随着生物技术的发展，酶工程将引起发酵工业和化学合成工业的巨大变革。21世纪酶工程的热点和前题，可能包括基因工程和蛋白质工程的应用，人工合成酶和模拟酶、核酸酶和抗体酶，分子酶学，酶的定向固定术，杂交酶，分子发动机，酶化学技术，非水酶学，糖生物学和糖基转移酶，酶标药物，端粒酶，极端环境微生物和不可培养微生物的新酶种， 酶在环境保护方面的应用等。;细 胞 融 合 ; 酶工程5 酶工程 ; 微生物作为酶生产来源的优点 生长繁殖快，生活周期短，产量高，酶比活很高； 培养方法简单，原料来源丰富，经济效益高； 微生物菌株种类繁多，酶的品种齐全； 可以通过诱导、诱变及基因工程等方法培育出新的产酶量高的菌种。;5.1.1优良产酶菌种的筛选 优良的产酶菌种应具备的优点 繁殖快、产酶量高 能在便宜的底物上生长良好 产酶性能稳定、菌株不易退化 产生的酶容易分离纯化 ; 产酶菌种的筛选方法 筛选步骤 产酶菌株的检测 胞外酶的产酶菌株的检测 胞内酶的产酶菌株的检测;5.1.2基因工程菌（细胞）的构建 构建基因工程菌的目标 改善原有酶的各种性能 扩充可安全使用的酶源 ; 酶基因克隆及表达的基本步骤 能产生目的酶的生物  酶的纯化 总m RNA的纯化  测定N端部分氨基酸序列 mRNA 设计引物 RT-PCR  与合适的载体重组、重组子筛选与鉴定  转入工业生产用的宿主（工程菌或工程细胞），如米曲霉 酶的工业化生产 ; 克隆酶基因的宿主-载体系统应具备的特性 所希望的酶占细胞总蛋白量的比例要高; 菌体容易大规模培养，生长无特殊要求； 载体与宿主相容，且能在宿主中稳定维持； 宿主的蛋白酶尽可能少； 宿主菌对人安全，不分泌毒素。 ;5.1.3 微生物酶的发酵生产 5.1.3.1 培养基 碳源 氮源 无机盐类 生长因子 pH值 ;5.1.3.2 酶的发酵生产方式 固体发酵法 液体深层发酵法 温度 通气和搅拌 pH值 ;5.1.3.3 提高酶产量的措施 添加诱导物 酶的作用底物 酶的反应产物 酶的底物类似物 ;降低阻遏物浓度 可采用难利用的碳源，或采用分次添加碳源的方法使培养 基中的碳源保持在不至于引起分解代谢物阻遏的浓度。 表面活性剂 非离子型表面活性剂常被作为产酶促进剂， 但作用机制尚不清楚。 添加产酶促进剂 产酶促进剂是指那些能提高酶产量但是作用机制尚未阐 明的物质，它可能是酶的激活剂或者稳定剂，也可能是产酶微 生物的生长因子，或者是有害金属的螯合剂。如，添加植酸钙 可使多种霉菌的蛋白酶和橘青酶（P.citrinum）的5’-磷酸二酸 酯酶的产量提高2~20倍。 ; ; 5.2.1 酶制剂的制备 破碎细胞 溶剂抽提 离心分离 浓缩 干燥 ;5.2.2 酶的纯化与精制 5