宋存江《生物技术概论》3.细胞工程-2012-04-18.pptVIP

3. 细胞工程;3. 细胞工程;细胞工程 在细胞水平上研究、开发和利用各类细胞的工程。科学家可以根据设计，改变或不改变细胞的遗传基础。进行无菌操作，大量培养细胞、组织乃至完整的个体；也可以通过大量培养细胞获得它们的代谢产物。;3.1 细胞工程的基础知识与基本技术;3.1.2 基本操作 无菌操作概念与技术 ;细胞培养技术 细胞培养是指动物、植物或微生物的细胞在体外无菌条件下的保存和生长。虽然这些细胞培养在营养要求等方面有许多差异，但他们在细胞培养方面有共同之处。首先，要取材和除菌。除了淋巴细胞可直接抽取以外，植物材料在取材后、动物材料在取材前都要用一定的化学试剂进行严格的表面清洗和消毒，有时还需借助某些特定的酶，对材料进行预处理，以期得到分散生长的细胞。其次，根据各类细胞的特点，配制细胞培养基，并对培养??进行灭菌或除菌。;; 3.2 植物细胞工程;3.2.1 植物组织培养;离体的植物器官、组织、细胞;; 细胞工程 3.2.1 植物组织培养;;除菌与接种 自来水多次漂洗 消毒剂处理 无菌水反复冲洗 外植体 无菌滤纸吸干 切割 ; 消毒剂 使用浓度/% 清除 消毒时间/min 灭菌效果 次氯酸钠 2 容易 5~30 很好 次氯酸钙 9~10 容易 5~30 很好 漂白粉 饱和溶液 容易 5~30 很好 升汞 0.1~1 较难 2~10 最好 酒精 70~75 容易 0.2~2 好 过氧化氢 10~12 最容易 5~15 好 溴水 1~2 容易 2~10 很好 硝酸银 1 较难 5~30 好 抗生素 4~50 mg/L 中等 30~60 较好;基本组分 微量无机物 微量有机物 琼脂; 添加较高浓度的生长素 固体培养 液体培养 光照培养 黑暗培养;吲哚乙酸（IAA）,常用1～10mg/L 吲哚丁酸（IBA）,常用1～5 mg/L 2，4-D（ 2，4-二氯苯氧乙酸），常用10-5～10-7 mol/L 萘乙酸（NAA），常用1.0 mg/L;细胞分裂素类激素; 继代增殖阶段;光照培养室;生长素与细胞分裂素对于细胞生长与分化具有协同作用，它们的量以及比例的不同，对细胞分化起着重要的作用。 外植体本身内源激素水平的差异，导致它们分化时对培养基中所添加的这两种激素量及其比例反应不尽相同。; 细胞工程 生根长芽阶段;保湿是关键 避免强光直射 温度适宜;手指玫瑰;3.2.2 植物细胞培养和次生代谢物生产; 产量 物 种 天然产物 细胞培养 原植物 橘叶鸡眼藤 蒽醌 900μg/g干重 110 μg/g干重 决明 蒽醌 鲜重的0.334%