枸杞多糖检测方法科研申报枸杞多糖检测方法科研申报.doc

2010年研究生《科研项目申报技巧与途径》选修课考试题 学号： 200930130439 姓名： 王畅 所属班级： 英语六班 所属专业： 药物分析 入学年份： 2009 导师姓名：於洪建 一、课题名称： 枸杞多糖质量标准研究 二、关键词： 枸杞多糖;指纹图谱;高效液相色谱法;柱前衍生化 中文摘要： 枸杞多糖的单糖组成测定是控制枸杞多糖质量标准和提供多糖基本信息的最重要环节。本实验因单糖存在互变异构体、 差向异构体、结构相似等特征 ,而且往往同一待测样品 ,如多糖、寡糖、糖肽、糖蛋白等 ,可能含有许多类型的单糖。所以采用 PMP柱前衍生化反相高效液相色谱 (HPLC)法,通过梯度洗脱建立了9种常见单糖的分离模式做对照 ,并将95%纯度的枸杞多糖水解用同样的衍生化成功地分离枸杞多糖的单糖组成分,分离效果好，具有良好的重复性。结果表明枸杞多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖7种单糖组成,摩尔比为2.05∶1.20∶1∶0.90∶0.85∶0.38 。该 HPLC方法是简单，快速，灵敏，方便的分析技术 ,可用于枸杞多糖的质量控制。 课题立项依据： 1.枸杞多糖单糖组分复杂 枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide）简称LBP，是茄科植物枸杞的活性成份之一，由杂多糖的糖链与蛋白质的肽链以共价键的形式结合的含肽糖类，是天然存在的大分子物质[1-3]。因为组成多糖的单糖品种繁多，而且即使只有一种单糖组成的多糖，因其连接方式的不同并可能有分支，也有可能得到结构很复杂的多糖，所以多糖结构分析比蛋白质或核酸要复杂得多。此外，由于多糖结构的微观不均一性，或分子量发散，使多糖结构分析很难得出完全准确的结构式。多糖结构的分析包括单糖组成[4-5]，单糖间的连接方式、糖苷键构型、分支位点及分支数目，最终确定其重复结构单元。多糖结构分析的手段分为物理手段、化学降解法、酶降解和免疫化学法等。其中物理手段有IR、NMR和MS等；化学降解法有完全酸水解、部分酸水解和氧化性裂解等。但由于多糖结构的复杂性，??前还没有一种方法可以单独完成其结构分析，必须将多种方法结合使用[6-8]。仪器分析法是在化学分析法的基础上更进一步地了解和研究多糖的结构特性。与化学分析法相比，仪器分析法具有快速、准确、灵敏和操作方便等优点，是糖链分析不可缺少的手段。目前，在此方面应用较多的有UV、HPLC、IR、GC、MS、NMR及电泳等。这些现代分析技术的出现和发展以及仪器的联用，大大促进了糖链结构研究工作的发展。制定统一的质量标准需要结合枸杞多糖本身的实际特点才能得以实施，从而保护消费者的权益。 2.多糖的生物活性 近年来，在对免疫物质以及新药物资源的研究过程中，人们发现糖类参与了生命科学中细胞的各种活动，具有多种多样的生物学功能。枸杞多糖及其缀合物对多种危害人类健康的疾病，如免疫紊乱、肝炎、高血压、癌症、糖尿病、血栓等，都具有显著的疗效[9-10],其中最引人注目的是它们的免疫修饰和抗肿瘤活性。多糖还具有抗辐射、抗衰老、抗凝血等功效。因此，枸杞多糖的研究与开发已日益引人注目。 3.枸杞多糖的研究意义 目前糖生物学及糖工程己成为继基因工程和蛋白质工程之后的第三大生工程，是当今最前沿的生物学科之一[11-13]。由于多糖多种多样的生物活性以及在保健和疾病治疗领域的广泛使用，使多糖生物资源的开发利用和研究日益活跃，成为天然药物、生物化学和生命科学等的研究热点。到目前为止，已有300多种多糖类化合物从天然产物中被分离出来[14]。 4.国内外枸杞多糖的研究现状 我国近年来对枸杞多糖药物活性已有广泛报道，例如：报道枸杞多糖有降血糖，抗衰老、抗病毒、抗遗传损伤、抗肿瘤、抗放射、抗突变、等药物活性，但弄清结构说明构效关系尚少见，由于产地的不同全国范围内还没有报道过枸杞多糖质量标准研究，特别是枸杞多糖的HPLC指纹图谱。 中草药作为药物开发及理论研究，我国已落后于日本和韩国。国际上对糖类的研究日新月异，内容包括糖生物学和糖工程等，并且相继多次召开了有关“糖生物学和糖工程”的专题会议。1995年3月，亚洲分子生物学组织(AMBO)还在日本举办了“糖生物学和糖工程”培训班[15]。欧盟在1994－1998年的研究计划中启动了“欧洲糖研究与开发平台”，旨在协调欧洲的糖研究与开发，强化在