研究生实验技能培训讲座－细胞培养基本知识.pptVIP

研究生实验技能培训讲座 －－细胞培养基本知识 ;基本概念; 细胞培养(cell culture)技术 即是选用各种细胞的最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术，是广泛应用于医学研究领域的重要技术。 ;细胞系;细胞株;细胞系或细胞株的命名 ;原代培养;传代;传代注意事项;细胞培养的基本条件;细胞培养的无菌环境 ;;生物安全柜 ;常用培养器皿及清洗消毒 ;消毒前包装;火焰消毒;细胞培养的实验用品 ;细胞培养板 ?6孔， 12孔， 24孔， 48孔 96孔;细胞培养皿 ?35mm ?60mm? 100mm? ;冻存管 1.2ml 2ml， 5ml;离心管 ?15ml ?50ml 细胞刮;滤 器;;液氮罐;;;何处购买细胞;国内细胞库;sub.whu.edu.cn/cctcc/fzlbc/pywml.htm 中国典型培养物保藏中心 也称武汉大学保藏中心，是国家知识产权局指定的专利培养物/生物材料／菌种保藏机构;订购程序;细胞的营养;细胞??养液 ;水：新鲜配置的三蒸水或去离子水 桶装水：怡宝 ;平衡盐溶液; pH调节液 (1) 碳酸氢钠液 (2) Hepes缓冲液 是一种可以保持细胞培养过程中pH值较长时间稳定的氢离子缓冲剂 通常使用浓度为10～15mM ; 消化液 胰蛋白酶溶液 主要作用是使细胞间的蛋白质水解，从而使贴壁细胞从瓶壁上脱落并使细胞游离分散开来 常用浓度为0.25%或5%胰蛋白酶。 (2) EDTA溶液 作用机制是破坏细胞间的连接。 对于一些贴壁特别牢固的细胞，可用EDTA和胰酶的混合液 EDTA溶液的使用浓度为0.02%，配制时应加碱助溶 (3)胶原酶溶液 胶原酶在上皮类细胞原代培养时经常使用，胶原酶作用的对象是胶原组织，因此不容易对细胞产生损伤。 ; 抗生素溶液 通常是青霉素和链霉素联合使用，俗称“双抗溶液”。 青霉素主要是对革兰阳性菌有效，链霉素主要对革兰阴性菌有效。加入这两种抗生素可预防绝大多数细菌污染。 培养基内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升100单位。 庆大霉素：每毫升100单位 ;培养基;合成培养基;RPMI1640;RPMI1640种类;DMEM细胞培养基;干粉培养基的配制 ;血清的使用;牛血清;何谓FBS、FCS、 CS、HS ?;血清解冻步骤;无机盐;氨基酸 ;休息一会儿吧！;体外培养细胞的分型 ;贴附型;;成纤维细胞; HUVECs人脐静脉内皮细胞 1.细胞种类：人脐静脉内皮细胞；2.培养的天数：4d；原代培养；3.放大倍速：倒置显微镜 X20；4.培养基种类：DMEM+15％胎牛 血清；5.细胞状态与特征简述：细胞呈梭 形，扁平形或多角形，贴壁生长。 ;2、上皮型细胞;上皮型细胞; SKOv3 （卵巢癌细胞） 1.细胞种类：SKOv3（卵巢癌细胞） 2.培养的天数：传代后3d；3.放大倍速：倒置显微镜 X10；4.培养基种类：DMEM+5%胎牛血清；5.细胞状态与特征简述：细胞贴壁生 长，生长速度较快。 ;3、游走细胞型： 　　呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。 ;4、多型细胞型;悬浮型; HL-60 分化细胞Giemsa染色 1. 细胞种类：HL-60； 2. 培养的天数：ATRA 1微摩尔作用5天；3. 放大倍速：倒置显微镜 X10；4. 培养基种类：1640+8％胎牛血清；5. 细胞状态与特征简述：悬浮细胞，分化的细胞核浆比例减小，核仁减少或 消失，胞核呈杆状或分叶状。 ; KU812 1.细胞种类：人嗜碱细胞性白血病细胞系；2.培养的天数：5d；3.放大倍速：倒置显微镜 X20；4.培养基种类：RPMI1640+10%新生牛血清；5.细胞状态与特征简述：细胞呈圆形，悬浮生长。 ; HeLa细胞1.细胞种类：人HeLa细胞传代培养；2.培养的天数：7d；3.放大倍速：倒置显微镜 X200；4.培养基种类：DMEM+10%小牛血清；5.细胞状态与特征简述：细胞呈多角形，贴壁生长。 ; K562细胞