凝胶过滤层析选编.ppt

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代谢调节实验;实验报告的书写;实验一 凝胶过滤层析法分离蛋白质;二、实验原理;2. 层析技术(色谱技术);(1)层析系统的基本组成;待分离混合物(A、B)随流动相通过固定相;(2)层析法的分类; 按层析原理分类 ; 按操作形式不同分类 ;(3)层析技术的优点;3. 凝胶过滤层析法 (gel filtration chromatography);;(2)凝胶的特点;(3)凝胶的选择;Sephadex G-50: 对多肽及蛋白质的筛分范围(分子量)为: 1500 – 30000 Sephadex G-200: 对多肽及蛋白质的筛分范围(分子量)为: 5000 – 80000;B. 琼脂糖凝胶 ( 商品名: Sepharose , Bio- gel – A ) 对实验条件要求高 ( 温度, pH ) <40℃ 4.5- 9.0 工作的下限是葡聚糖凝胶工作的上限, 用于大分子物质的分离;C. 聚丙烯酰胺凝胶 商品名: Bio – gel – P(生物胶P);三、 实验操作;2. 凝胶选择、制备;制备: 将干胶颗粒悬浮于5 ~ 10倍的蒸馏水或洗脱液中 充分溶胀,溶胀之后将极细的小颗粒倾泻出去;3. 凝胶装柱;注意点:;4. 平衡;5. 加样;6. 洗脱;缩二脲反应 (双缩脲反应);四、 实验结果与讨论

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