全细胞催化合成L_苯基乳酸重组大肠杆菌的构建_王颖1.pdfVIP

研究报告 : DOI 10． 13995 /j． cnki． 11 － 1802 /ts． 201512003 全细胞催化合成 L-苯基乳酸重组大肠杆菌的构建* 王颖1，2 ，范铭2 ，薛素妹2 ，钱凯2 ，齐斌2 ，朱益波2 ( ， ， ) 1 吉林农业大学 食品科学与工程学院 吉林 长春 130118 ( ， ， ， ) 2 常熟理工学院 生物与食品学院 苏州市食品生物技术重点实验室 发酵工程技术研究中心 江苏 常熟 215500 摘 要 苯基乳酸是一种新型天然广谱抑菌物质，L-乳酸脱氢酶是微生物转化苯丙酮酸合成 L-苯基乳酸的关键 酶，通过构建过量表达 L-乳酸脱氢酶的重组大肠杆菌，提高大肠杆菌合成 L-苯基乳酸( 苯基乳酸，phenyllactic acid， PLA) 的能力。以 Bacillus megaterium Z2013513 基因组为模板，经 PCＲ 扩增得到 L-乳酸脱氢酶基因，连接表达载体 pET-28a( + ) 并导入到大肠杆菌 BL21( DE3) ，获得重组大肠杆菌 BL21( DE3) /pET-28a-ldhL。SDS电泳和酶活分 析表明，约在40 ku 处出现显著特异性条带，粗酶液酶活力达 3. 4 U/mg。在37 ℃、200 r /min 条件下，25 g/L( 干重) 重组 大肠杆菌经 60 min 将 70. 32 mmol /L 苯丙酮酸全细胞转化合成 50. 59 mmol /L L-苯基乳酸。由于具有较高的产物光学 纯度( 96. 98% e. e. ) 和底物摩尔转化率( 71. 94% ) ，表明一步生物转化法能高效地合成 L-苯基乳酸。 关键词 L-苯基乳酸; L-乳酸脱氢酶; 巨大芽孢杆菌; 重组大肠杆菌; 全细胞转化 ( ， ) ， 苯基乳酸 phenyllactic acid PLA 即 2-羟基-3- 关键位点基因突变导致重组菌转化能力明显提高至 ［ ］ ［ ］ ［ ］ ， 1 － 3 21 22 苯基丙酸 是一种应用广泛的手性化合物 。近年 77% 摩尔转化率 。ZHENG 报道用凝结芽孢杆 ， ( ) 来 研究发现 PLA 对大多数食源性致病细菌和真菌 菌 Bacillus coagulans SDM 全细胞生产苯基乳酸产 ［ ］ 4 － 7 ， ， 具有广谱而高效的抗菌活性 引起食品行业普遍 量高达 37. 3 g /L 转化率为 70% 。Leuconostoc mesen- ［ ］