分子实验常用设备及危险药品的使用规范.doc

分子实验常用设备及危险药品的使用规范 一、常用设备的使用规范 1.高速离心机 离心机的功能是用来分离纯化组分。离心机可分为（1）低速离心机：每分钟几千转，用来分类细胞等大分子，（2）高速离心机：每分钟1 ~ 3万转，用来分离DNA，蛋白等，（3）超速离心机：每分钟3万转以上，主要用来分离病毒，蛋白等。 以台式高速离心机（IBM）为例（配有角式转头：24×1.5ml；极限转速20000rpm），其使用步骤如下： 1）把离心机放置于平面桌或平面台上，目测使之平衡，用手轻摇一下离心机，检查离心机是否放置平衡。 2）打开门盖，将离心管放入转子内，离心管必须成偶数对称放入，且要事先平衡，完毕用手轻轻旋转一下转子体，使离心管架运转灵活。 3）关上门盖，注意一定要使门盖锁紧，完毕用手检查门盖是否关紧。 4）插上电源插座，按下电源开关（电源开关在离心机背面，电源座上方）。 5）设置转子号、转速、时间：在停止状态下时，用户可以设置转子号、转速、时间，此时离心机处于设置状态，停止灯亮、运行灯闪烁；按下启动离心开始（常用，最高转速为13000r/min，时间最长为20分钟）；注意：对应的转子一定要设置在相应的转速范围内，不可超速使用，否则对试管或转子有损坏。 6）离心机时间倒计时到“0”时，离心机将自动停止，当转子停转后，打开门盖取出离心管，关断电源开关。 注意事项： 1）离心机在运转时，不得移动离心机，不要打开门盖。 2）安放离心机的台面应坚实平整，四只橡胶机脚都应与台面接触和均匀受力，以免产生振动。 3）离心前，离心管加液要平衡，若加液差异过大运转时会产生大的振动，此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必须成偶数对称放入。 4）若运转时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停机处理。 5）离心机彻底停止后，才可开盖，取样。 2.PCR仪 PCR仪，也称DNA热循环仪、基因扩增仪，是使一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段，它的每一循环包括在三种不同温度进行DNA变性、引物复性、DNA聚合酶催化的延伸反应的三个过程 。PCR仪主要应用于基础研究和??用研究等许多领域，如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等等。 1）开机：打开开关，视窗上显示“SELF?TEST”,显示10秒中后，显示RUN-ENTER菜单 准备执行程序。 2）放入样品管，关紧盖子。 3）如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》， 用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示 按《Proceed》选择ENABLE，则开始执行程序。 4）如果要输入新的程序，则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTER?PROGRAM,按《Proceed》， 1）命名新的程序，最多8个字母，输入后按《Proceed》确认(如何输入字母、数字)。 2）输入程序步骤：名字输入后，确认，然后输入相关程序 5）输入完成的程序后，到RUN-ENTER菜单，选择新程序，开始运行。 6）其它：用《pause》可以暂停一个运行的程序，再按一次继续程序。 用《stop》或《Cancel》可停止运行的程序。 如何设置一个PCR程序： 一般分为8步： 1）预变性：可用94～95℃，2～10min,一般用 5min。 2）变性：一般用95℃，30s~2min,一般 45s~1min。 3）退火：温度自定，30s~2min。 4）延伸：72℃，对于〈1kb=1min,每增加 1kb加1min。 5）循环数：一般25～35个循环(2,3,4步循环）。 6）最终延伸：72℃，5～15min。 7）保存：4℃，时间设为0。 8）END。 3.凝胶电泳仪 电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类，自由界面电泳不需支持物，如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等，这类电泳目前已很少使用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物，常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等，分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳。应用电泳法可以对不同物质进行定性或定量分析，或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备。 以DYY-12型电脑三恒多用电泳仪（北京六一仪器厂）为例，一般操作步骤如下： 1）首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接，注意极性不要接反。 2）按电源开关，显示屏出现“欢迎使用DYY-12型电脑三恒多用电泳仪…”等字样后，同时系统初始化，蜂鸣4声，设置常设置。屏幕转成参数设置状态，根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。 3）确认各参数无误后，按“启动”键，启动电泳仪输出程序。在显示屏