发酵工程试验(一下,程庆佳,顾聚,九组)选编.pptVIP

发酵工程试验（一下，程庆佳，顾聚，九组）;实验一 微生物发酵工程实验;二、思考题;2、筛选 （1）、初筛： 培养基：葡萄糖5.0%，尿素1.0%,酵母膏0.2%，玉米浆0.2%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.04%，铁锰离子各两个2PPM，PH7.0 初筛方法：摇管法 步骤：①在大小合适的试管中装5ml发酵液，②在37度下振荡培养48小时，③对产物氨基酸和谷氨酸做测定，④挑选含量较高的菌株 （2）、复筛：仍旧采用上述培养基和上面的方法步骤 3、作正交试验 4、产物检测：对谷氨酸检测 将分离纯化得到的产物用常规的蛋白质水解法水解，用氨基酸分析仪分析水解后氨基酸的组成只出现了一个谷氨酸峰，证明产物是谷氨酸。 5、实验材料和器材 材料：采样土壤 器材：试管，三角瓶，刮子，接种环，接种针，吸管，棉花，酒精灯，培养箱，水浴锅，蛋白质水解酶，氨基酸分析仪。 ;实验二 柠檬酸产生菌的分离及筛选;;二、思考题;;实验三 还原糖及淀粉含量测定; 实验数据记录（标准葡萄糖液的消耗量ml ）;二、思考题;;;实验四 柠檬酸产生菌的初筛及产物的定性、定量检测;在此次试验中首先测定的是自制菌株和2112菌株的柠檬酸产酸量，分别滴定的体积为:V自=0.95ml V2112=2.05ml 柠檬酸（g/100ml）（自）=0.1067x0.95x64x10-3/1x100=0.65 柠檬酸（g/100ml）（2112）=0.1067x2.05x64x10-3/1x100=1.40;二、思考题;2、点样与展开的要求有哪些？ （1）、点样 a、先用铅笔在距5×10cm薄层板一端1cm处轻轻划一横线作为起始线，然后用毛细管吸取样品，在起始线上小心点样，斑点直径一般不超过2mm。 b 、若因样品溶液太稀，可重复点样。 c、若在同一板上点几个样，样点间距离应为1.0cm。两边各留0.5cm，避免边缘效应。 d 、点样要轻，不可刺破薄层。 （2）、展开 a、本实验用展开剂为：正丁醇／冰醋酸／水=12／3／5 b、薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行。 c、采用上升法 将色谱板垂直于盛有展开剂的容器中展开，待展开剂离薄层板顶端1cm左右时，取出，并用铅笔轻画上溶剂前沿的位置。 ;4、用发酵液与标准样品点样、展开后的Rf值和理论Rf值有差异的原因？ 可能有以下几点原因; （1）、在点样过程中，点样数量有所差异 （2）、在层析过程中，层析时间与标准有所差异。 ;实验五 第一次正交试验法 优选最佳发酵条件;L9(34)的正交表 使用;正交试验结果分析：极差法 （1）、计算各因素同一水平之和 ① 淀粉因素的三个水平之和分别为A1、A2、 A3 A1= 1.81+1.02+4.25=7.08 A2= 2.10+1.64+3.99=7.73 A3= 1.22+0.81+5.53=7.56 ② （NH4)2SO4因素的三个水平之和分别为B1、B2、 B3 B1= 1.81+2.10+1.22=5.13 B2= 1.02+1.64+0.81=3.47 B3= 4.25+3.99+5.53=13.77 ③ 麸皮 因素的三个水平之和分别为C1、C2、C3 C1= 1.81+3.99+0.81=6.61 C2= 1.02+2.10+5.53=8.65 C3= 4.25+1.64+1.22=7.11 ④ 接种量因素的三个水平之和分别为D1、D2、D3 D1=1.81+1.64+5.53=8.98 D2=1.02+3.99+1.22=6.23 D3=4.25 +2.10+0.81=7.16;（2）计算各因素同一水平的平均值 a1 = 7.08/3 =2.36 a2 = 7.73/3 = 2.58 a3 = 7.56/3 =2.52 b1 = 5.13/3 =1.71 b2 = 3.47/3 = 1.16 b3 = 13.77/3 =4.59 c1 = 6.61/3 =2.20 c2 =8.65 /3 =2.88 c3 = 7.11/3 =2.37 d1 = 8.98/3 =2.99 d2 = 6.23/3 =2.08 d3 = 7.16/3 =2.39 （3）计算极差R值，决定因素的主次顺序 R值是各因素同一水平的平均值中最大值减最小值之极差。如： A因素 Ra = 2.58—2.36=0.22 B因素 Rb = 4.59—1.16=3.43 C因素 Rc = 2.88—2.20=0.68 D因素 Rd = 2.99—2.08=0.91 主次关系排列：BDCA