郭云兰研究生毕业论文终版.doc

中文摘要 RMP对肝癌细胞增殖的影响及其分子机制研究 RMP对肝癌细胞增殖的影响及其分子机制研究 中文摘要 PAGE VI PAGE VII 硕 士 学 位 论 文 （2011届） RMP对人肝/肝癌细胞增殖和凋亡的影响 及其机制研究 Effects of RPB5-mediating protein (RMP) on biological property of hepatoma and hepatocyle cells 研究生姓名郭云兰指导教师姓名魏文祥 专业名称药理学研究方向分子肿瘤药理论文提交日期2011年4月 苏州大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。 论文作者签名： 日 期： 学位论文使用授权声明 本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。 涉密论文□ 本学位论文属 　　在 年 月解密后适用本规定。 非涉密论文□ 论文作者签名： 日 期： 导 师 签 名： 日 期： 中文摘要 目的： 本课题主要研究RMP对肝癌细胞增殖和凋亡的影响极其分子机制。体外实验着重研究RMP基因沉默和过表达对肝癌细胞生长增殖能力、迁移能力、粘附能力、细胞周期以及凋亡的影响及其机制。体内则通过裸鼠皮下荷瘤实验，构建裸鼠肝癌移植瘤模型，探讨RMP基因治疗/基因干预对肝癌移植瘤生长作用的机制。 方法： 首先，通过脂质体转染技术将RMP干扰质粒和RMP过表达质粒转染到肝癌/肝细胞中，建立RMP干扰和过表达瞬时表达细胞株，采用RT-PCR方法检测RMP在细胞中的表达水平；MTT法检测不同转染组细胞的生长增殖能力和粘附能力；通过划痕实验检测细胞的迁移能力；PI染色后经流式细胞术检测不同转染组细胞周期的变化；Annexin V-FITC-PI染色后经流式细胞术检测不同转染组细胞凋亡； Western-blot方法检测HL-7702细胞中各转染组细胞凋亡相关基因的表达；我们还通过裸鼠皮下荷瘤实验，建立裸鼠肝癌移植瘤模型，在裸鼠人肝癌细胞SMMC-7721移植瘤的瘤体内注射脂质体-质粒复合物，观察RMP对移植瘤的生长作用的影响；HE染色观察移植瘤细胞形态学变化，免疫组化法检测移植瘤组织中RMP、AFP、Bcl-2、Bax 和P53蛋白的表达。 结果： 体外实验：RMP 干扰质粒和RMP过表达质粒可以在细胞中瞬时表达；RT-PCR结果显示RMP在不同细胞系中均有不同程度的表达，在肿瘤细胞系中的表达水平普遍高于正常细胞系；MTT结果显示RMP可以促进肝癌细胞和正常肝细胞的增值，降低细胞粘附力；划痕实验提示RMP可以促进细胞的的迁移能力；流式细胞术检测细胞周期显示，RMP被干扰后，肝癌细胞出现明显的G2/M期阻滞，而正常肝细胞的周期则没有明显改变；Annexin V-FITC-PI细胞凋亡检测，RMP干扰后，肝癌细胞凋亡率增加，而肝细胞凋率无明显变化。RMP过表达后，肝癌细胞和肝细胞凋亡均有所降低； RMP基因在HL-7702细胞中过表达后，Western-blot方法检测显示促凋亡基因Bax和Caspase3表达下调，凋亡抑制基因Bcl-2表达上调。体内实验：成功构建了裸鼠肝癌细胞SMMC-7721移植瘤模型。RMP干扰组移植瘤生长缓慢，并且HE染色结果显示细胞凋亡增多，免疫组化检测结果提示干扰RMP后，Bax、P53蛋白表达上调，AFP、Bcl-2蛋白的表达下调。 结论： 本实验研究表明RMP在人的不同细胞系中广泛表达，并且在肿瘤细