蛋白印迹实验 抗核抗体谱检测.docxVIP

抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程 1.目的?规范抗核抗体谱(IgG)检测，保证结果的准确性。 2.适用范围?检验科免疫组工作人员。 3.试剂规格名称与组成 型号名称：ANA谱3 靶抗原：nRNP、Sm、SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP?B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白和AMA?M2 类型：IgG 基质：抗原包被的检测膜条 规格：16×01(16) 4.预期用途：用于体外定性检测人血清或血浆中的抗nRNP、Sm、SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP?B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白和AMA?M2共14种不同抗原IgG类抗体。 抗原疾病抗体阳性率(%)U1-nRNP夏普综合征（混合结缔组织病MCTD） 系统性红斑狼疮（SLE） 系统性硬化症 (SSc) 多发性肌炎皮肌炎95-100 15-40 2-12 12-16Sm系统性红斑狼疮（SLE）5-40SS-A(Ro)干燥综合征 系统性红斑狼疮（SLE） 新生儿红斑狼疮（NBC-SLE）40-95 20-60 95-100SS-B(La)干燥综合征 系统性红斑狼疮（SLE） 新生儿红斑狼疮（NBC-SLE）40-95 10-20 75Scl-70系统性硬化症(SSc) -弥散性 -局限性25-75 40-75 5-15PM-Scl系统性硬化症包括重叠综合症 多发性肌炎/系统性硬化症包括重叠综合症 系统性硬化症(PM-Scl 75+) 系统性硬化症(PM-Scl 100+)10-20 18 10 7Jo-1多发性肌炎/皮肌炎25-35CENP A,B,C,D系统性硬化症-弥散性 系统性硬化症-局限性 原发性胆汁性肝硬化 (PBC)80-95 8 10-30PCNA系统性红斑狼疮（SLE）3dsDNA系统性红斑狼疮（SLE）40-90核小体系统性红斑狼疮（SLE）40-70组蛋白 H1,H2A,H2B,H3,H4药物诱导的红斑狼疮 系统性红斑狼疮（SLE） 类风湿性关节炎95-100 50 15-50ARPA 核糖体P蛋白系统性红斑狼疮（SLE）10AMA-M2原发性胆汁性肝硬化 (PBC) 90 5.适应症：夏普综合征（MCTD），系统性红斑狼疮（SLE），干燥综合征，进行性系统性硬化症，多肌炎皮肌炎、重叠综合征、局限型进行性系统性硬化症（CREST综合征），原发性胆汁性肝???化。 6.临床意义：抗核抗体识别是各种细胞核组分 7.主要组成成分： 8.样本要求 样本：人血清或EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的血浆。 稳定性：待检患者样本于2-8°C可稳定14天，稀释后的样本应在同一个工作日内检测。 样本稀释：患者样本用样本缓冲液1:101稀释，如可取15ul血清用1.5ml样本缓冲液稀释混匀。 9.检验方法 9.1试剂 -阳性对照：100?倍浓缩。使用时用干净的吸管从瓶中吸取所需阳性对照，用样本缓冲液1:101稀释（已稀释）阳性对照用15ul + 样本缓冲液稀释1.5ml并充分混匀。 -酶结合物：10倍浓缩(E1) 0.15?ml + 样本缓冲液稀释(E2) 1.35?ml -样本缓冲液：直接使用。 -清洗缓冲液：10倍浓缩（W1）1ml + 蒸馏水(W2) 9ml -底物液：直接使用，对光敏感，使用后应立即盖紧瓶盖。 9.2 实验步骤 预处理: 取出膜条，膜条上有编号的一面朝上。在温育槽中分别加入1.5ml，于室温在摇摆摇床上温育5 min后，吸去温育槽中的液体。 血清温育第一次:?在温育槽中分别加入1.5?ml已稀释的血清样本，在摇摆摇床上室温（18°C-25°C）温育?30 min。 清洗:?吸去槽内液体，在摇摆摇床上用1.5ml清洗缓冲液清洗膜条5min×3。 酶结合物温育第二次:在温育槽中加入1.5ml已稀释的酶结合物（碱性磷酸酶标记的抗人IgG），于摇摆摇床上室温温育30 min。 清洗:吸去槽内液体，在摇摆摇床上用1.5ml清洗缓冲液清洗膜条5min×3。 底物温育第三次:在温育槽中分别加入1.5ml底物液，于摇床上室温（18°C-25°C）温育10 min。 终止:吸去槽内液体，用蒸馏水清洗膜条1min×3。 结果判断:? 将检测膜条放置在结果判定模板中，风干后判断结果。 在欧蒙印迹法自动操作仪（EUROBlotMaster）中使用该产品时，请选择方法列表中的?Euro01AAb?EL30。 抗核抗体谱（IgG）检测试剂盒（蛋白印迹法）实验操作 清洗缓冲液 W1 1ml + W2 9ml