第12章植物细胞大规模培养.ppt

;第十二章植物细胞大规模培养 教 学 内 容 ;前 言; Reinhard等（1968）首先将这种设想转变成现实，生产出了哈尔碱(harmine)。紧接着Kaul等（1969）、Furrya等(1972)和Teuscher等（1973）分别培养植物细胞获取了其中的薯蓣(yu山药）皂苷、人参皂角苷和维斯纳精（visnagin）。现在一些发达国家已集中相当数量的人力、财力潜心开拓这个经济潜力十分巨大的生产领域。目前世界最大批量工业化培养细胞（烟草细胞）已达2万升（20吨）。我国在“八五”、“九五”和“863计划”中连续拨款资助工业化培养红豆杉细胞生产抗肿瘤药物紫杉醇的研究，目前已达到60mg/L的世界先进水平。;表12-1植物细胞培养和从完整的植物生产紫草宁的比较; 与动物细胞培养相比，植物细胞培养的最大优点是植物细胞可以在简单的合成培养基上正常生长。用于植物细胞培养的基础培养基成分基本上与整个植物的要求一样，但是用于培养细胞、组织和器官的培养基需要满足各自的特殊要求。根据特定的植物种类和培养系统，培养基的基本营养成分可作适当的调整。; 植物生长激素 大多数植物细胞培养基中都含有天然的或合成的植物生长激素。生长激素包括了植物生长素、细胞激动素、赤霉素和脱落酸等四大类。 有机氮源 通常采用的有机氮源有蛋白质水解物、谷氨酰胺或氨基酸混合物等。P225 有机酸 加入丙酮酸，或者柠檬酸、苹果酸和琥珀酸等三羟酸循环的中间产物，能够保证植物细胞在以铵盐作为单一氮源的培养基上生长，并且使细胞对钾盐的耐受能力至少提高到10mmol/l。除此之外，这些有机酸还能提高低密度接种的细胞和原生质体的生长。 复合物质 在植物细胞的培养过程中，酶母抽提液、麦芽抽提液、椰子汁和水果汁等复合物质通常可以作为细胞的生长剂。;2、植物细胞培养基的制备 ; 由于培养基中的组份种类繁多，且一些组份量很小，配制起来很繁锁，因此往往把培养基配制成使用浓度的10或100倍的母液，使用时再按需要稀释至使用浓度。培养基母液或经稀释后的培养基应置于冰箱内，在10度以下保存待用。一般含有有机物或激素类??质的培养基母液或稀释液最好保存时间不超过十天。 在培养基配制过程中需要注意的是，为了防止在高浓度下，培养基份间相互作用产生沉淀，诸如CaCL2、KI、EDTA的钠或亚铁盐需要单独配制保存，使用时再稀释混合。; 固体培养： 固体培养是在微生物培养的基础上发展起来的植物细胞培养方法。固体培养基的凝固剂除特殊研究外，几乎都使用琼脂，浓度一般为6%-10%。接种材料放在培养基上，原生质体固体培养则需混入培养基内进行嵌合培养，或者使原生质体在固体-液体之间进行双相培养。 液体培养： 液体培养也是在微生物培养的基础上发展起来的植物细胞培养方法。液体培养可分为静止培养和振荡培养等两类。静止培养不需要任何设备，适合于某些原生质体的培养。振荡培养需要摇床或转床等设备使培养物和培养基保持充分混和以利于气体交换。 悬浮培养：（主要） 植物细胞的悬浮培养是一种使组织培养物分离成单细胞并不断扩增的方法。在进行细胞培养时，需要提供容易破裂的愈伤组织进行液体振荡培养，愈伤组织经过悬浮培养可以产生比较纯一的单细胞。用于悬浮培养的愈伤组织应该是易碎的，这样在液体培养条件下能获得分散的单细胞，而紧密不易碎的愈伤组织就不能达到上述目的。 固定化培养 ?主要 固定化培养是在微生物和酶的固定化培养基础上发展起来的植物细胞培养方法。该法与固定化酶或微生物细胞类似，应用最广泛的、能够保持细胞活性的固定化方法是将细胞包埋于海藻酸盐或卡拉胶中。;三、植物细胞的大规模培养技术 ;悬浮培养中的植物细胞的特性 ;植物细胞培养过程中的氧传递 ;悬浮细胞的生长与增殖 ;细胞团和愈伤组织的再形成和植株的再生 ;表12-1植物细胞培养和从完整的植物生产紫草宁的比较;2、植物细胞或原生质体的固定化培养 ; 针对上述细胞悬浮培养的缺点，Brodelius等（1979）首次报道了用海藻酸钙成功固定培养橘叶鸡眼藤、长春花、希腊毛地黄细胞。实验证明，细胞分化和次生物质积累之间存在正相关性。细胞固定化后的密集而缓慢的生长有利细胞的分化和组织化，从而有利于次生物质的合成。此外，细胞固定化后不仅便于对环境因子的参数进行调控，而且有利于在细胞团间形成各种化学物质和物理因素的梯度，这可能是调控高产次生物质的关键。 ; 以下简