瑞舒伐他汀对乳鼠心脏成纤维细胞增殖和凋亡的影响（学术论文）.docVIP

KKME---专业医学搜索引擎/ 瑞舒伐他汀对乳鼠心脏成纤维细胞增殖和凋亡的影响 　　作者：王倩 崔炜 张海林 李亚 作者单位：河北医科大学第二医院 河北省心脑血管病研究所心内科，河北 石家庄 050000 　　【摘要】目的 研究瑞舒伐他汀(Ros)对SD乳鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的抑制作用，探讨其诱导CFs凋亡的作用机制。方法 采用新生SD大鼠CFs进行体外培养，单独给予10-5，10-6，10-7，10-8mol/L Ros或与10-5mol/L焦磷酸法尼酯(FPP)联合进行干预，应用MTT比色、BrdU比色、瑞氏吉姆萨染色倒置生物显微镜、Hochest 33258染色荧光显微镜、流式细胞分析技术等方法观察Ros对CFs增殖的抑制作用和其对CFs凋亡的诱导作用。结果 Ros不仅可明显抑制新生SD大鼠CFs增殖和DNA合成，且可诱导CFs凋亡。10-5mol/L FPP可部分逆转此作用。结论 Ros为有效的抗心脏纤维化药物，不仅可明显抑制纤维化进程，还可逆转已出现的纤维化。 　　【关键词】 大鼠;成纤维细胞;细胞增殖;凋亡;瑞舒伐他汀;焦磷酸法尼酯 　　他汀类药物因其安全可靠的降脂作用和心血管保护作用，在临床上广为应用。然而，目前他汀类药物的应用范围主要局限于高脂血症者及冠心病患者，对于心衰患者是否应用及其利弊一直存在着争议。本文主要观察新型降脂药瑞舒伐他汀(Ros)对SD乳鼠心脏成纤维细胞(CFs)的增殖抑制作用，和对CFs凋亡的诱导作用，为他汀类药物在心衰患者应用的可行性提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要仪器及试剂 　　CO2培养箱(Heal Force);生物安全柜(Heal Force);倒置生物显微镜(Olympus 1×71);相机(Canon DS126181);倒置荧光显微镜(Nikon Ellipse TE2000S);酶标仪(Fluostar);离心机(Anke TDL802C);恒温振荡器(富华SHZ82);Ros(石药集团中奇制药技术有限公司，批号规格：原料药);焦磷酸法尼酯(FPP)(瑞士Enzo life sciences公司);DMEMF12培养基(美国Gibco公司);胎牛血清(奥地利PAA);胰蛋白酶(美国Gibco公司);噻唑蓝(MTT)(美国Biosharp公司);二甲基亚砜(DMSO)(美国Amersco公司);溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)试剂盒(德国Roche公司);瑞氏吉姆萨染液(珠海贝索生物技术有限公司);细胞凋亡检测试剂盒(Hochest 33258，美国Biosharp公司)。 　　1.2 实验动物及CFs的培养和鉴定 　　取2～3天龄的SD大鼠(河北医科大学实验动物中心提供,许可证号：1001007)。无菌开胸，剪取心室，用DHanks液清洗，剪碎。0.125%胰蛋白酶+0.01%乙二胺四乙酸(EDTA)消化液反复消化，分别收集各次消化细胞悬液，加入10%胎牛血清的DMEMF12培养基，离心，弃上清液。再加10%胎牛血清的DMEMF12培养基，制成细胞悬液，置37℃、5% CO2培养箱内培养。根据CFs比心肌细胞贴壁速度快的特点，差速贴壁60 min，倾去上层未贴壁细胞，剩余的即为CFs，加入10%胎牛血清的DMEMF12培养液继续培养。经倒置显微镜观察，免疫组化波形蛋白单克隆抗体阳性，鉴定为所需要的CFs，细胞纯度达98%。待CFs生长接近融合时以1∶2传代，实验用2～4代细胞。 　　1.3 实验分组 　　实验共分9组，空白对照组;10-5mol/L Ros组;10-6mol/L Ros组;10-7mol/L Ros组;10-8mol/L Ros组;10-5mol/L Ros+10-5 mol/L FPP组;10-6 mol/L Ros+10-5 mol/L FPP组;10-7 mol/L Ros+10-5 mol/L FPP组;10-8 mol/L Ros+10-5 mol/L FPP组。 　　1.4 MTT法测定细胞增殖 　　取对数生长期CFs 5×107/L接种于96孔板中，37 ℃、5% CO2及饱和湿度下培养24 h后，吸弃各孔培养基，分别加不同浓度的药物，继续培养24 h，每组设8个复孔。各组于药物刺激结束前4 h，每孔加入5 mg/ml MTT 10 Μl，37 ℃继续培养4 h后终止培养，吸弃上清液，每孔加入150 Μl DMSO，振荡混匀，在酶标仪上选取490 nm波长测定吸光度值(A490值)。 　　1.5 BrdU法测定细胞DNA合成 　　取对数生长期CFs 5×107/L接种于