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抗体的制备与应用

抗体的制备与应用;抗原决定基-抗原特异性的分子基础;T细胞决定基(T细胞表位):T细胞决定基主要位于抗原分子内部,必须由APC将抗原加工处理为小分子多肽并与MHC分子结合,然后才能被TCR所识别。 B细胞决定基(B细胞表位):BCR能直接识别未经APC加工的天然抗原,其识别的B细胞表位主要位于抗原分子的表面,与BCR具有易接近性。;Antibody Structure and Function;;peptide;抗体的功能; C区的功能 激活补体 Immune complex(IC) ? 激活补体经典途径 与细胞表面FcR结合 1)调理作用(opsonization); IgG 或IgM的Fc段与吞噬细胞表面FcR结合?促吞噬; 2)抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用 (Ab-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC) 3) 介导I型超敏反应 IgE的Fc段与肥大细胞表面FcR结合?受体桥联?细胞活化 穿过胎盘和粘膜 IgG通过胎盘;sIgA穿过粘膜;;主要内容;概述 ;姓名;第一节 多克隆抗体的制备与应用 (polyclonal antibody,PcAb) ;多克隆抗体的制备流程 ;传统抗血清 (多克隆抗体);多克隆抗体的优缺点; 抗A;第二节 单克隆抗体的制备与应用 (monoclonal antibody,McAb) ;单克隆抗体制备流程;; ;3.杂交瘤细胞的筛选;DNA合成途径;;4、杂交瘤细胞的筛选和克隆化 筛选: 免疫荧光 ELISA等 克隆化: 有限稀释法 单个细胞显微操作法 软琼脂培养法;配制方案:杂交瘤细胞((1~5)x106/ml) + 细胞冻存液(30%~40% 牛血清,50%~60% RPMI-1640培养液,10%DMSO ) “慢冻”:分步冷冻,30℃→-70℃→液氮? “快融”:取出立即浸入37℃~40℃水浴中,使其迅速融化、复苏;;;单克隆抗体(McAb)的优缺点 优点: 成分、结构均一,特异性强。一种McAb分子的所有区域完全相同,只针对一种抗原决定基,避免了交叉反应。 效价高 使用一种抗原免疫动物,可以获得针对不同抗原决定基的不同特异性的McAb。 杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖、传代,因此产量高,可连续生产;;单克隆抗体在医学上的应用;;单克隆抗体用于免疫治疗存在的问题 单克隆抗体的特异性 由于肿瘤特异性抗原较少,缺乏对肿瘤有严格特异性的单抗,对正常组织有交叉反应 异种抗体反应 鼠源性单抗用于人体,导致超敏反应 生产成本高,技术要求高,稳定性差,难于普及应用 ;第三节 基因工程抗体的制备与应用 (genetic engineering antibody,GeAb) ;基因工程抗体产生的时代背景 1、单克隆抗体的毒副作用 2、人杂交瘤技术未获真正突破:融合率低、建株难、不稳定、产量低、人体不能随意免疫 3、现代免疫学和分子生物学技术的推动 4、基因工程抗体的优点 ;基因工程抗体的优点: 易于获得稀有抗体; 人抗鼠抗体反应(Human anti-mouse antibody reaciton, HAMAR)低; 小分子抗体:渗透力强、HAMAR低、亲和性高、靶向性高、组织非特结合少等。;基因工程抗体的分类 1、全抗体 (1)嵌和抗体(chimeric antibody) (2)人源化抗体(humanized antibody) 2、小分子抗体 (1)Fab (2)ScFv (3)单域抗体 (4)分子识别单位 ;3、其它抗体;;一、基因工程全抗体;基因工程全抗体研发的演变历程;(一)嵌和抗体(chimeric antibody) 1、概念 指由两种不同来源的基因所编码的抗体。 2、原理 从鼠源的单克隆抗体杂交瘤细胞株分离并鉴定抗体V区基因,再通过适当的技术将其连接到人抗体C区基因上,构建Vm(mouse)-Ch(human)嵌和基因,并转入适当的受体细胞表达。;嵌合抗体;;3、嵌和抗体的优缺点: 优点: 特异性强 亲和性高 具有全抗体的所有功能 半衰期长、疗效显著 缺点: 有10-50%发生HAMA 靶向性差;(二)人源化抗体(humanized antibody) 1、概念 指利用基因工程技术,在嵌合抗体基础上,针对嵌合抗体仍然具有较高的HAMA反应的问题,进一步对

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