高中生物2017年第1部分专题5课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段(选修一)课件.pptVIP

第 1 部分; 1.DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只 能从3′端延伸DNA链。 2．DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′ 端延伸。 3．PCR反应需要DNA模板、引物、四种脱氧核苷酸、耐热 的DNA聚合酶等条件。 4．PCR原理：DNA热变性的原理。 5．PCR每次循环都包括变性、复性和延伸三步。 6．PCR扩增DNA片段可以使目的片段呈指数增长。; [自读教材·夯基础] 1．细胞内DNA复制的条件; 2．PCR扩增的原理及条件 (1)PCR技术：即 ，是一种 迅速扩增 的技术。它能以极少量的 为模板，在短时间内复制出上百万份的DNA拷贝。 (2)扩增方向：总是从子链的 端向 端延伸。; (3)引物： ①特点：是一小段 或 ，能与 的一段碱基序列互补配对，用于PCR的引物长度通常为 个核苷酸。 ②需要引物的原因：DNA聚合酶不能 ，而只能从 延伸DNA链，因此DNA复制需要引物。;DNA的热变性;3．PCR的反应过程 (1) ：温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解旋为 　　　 单链 ? (2) ：温度下降到50 ℃左右，两种引物通过碱基互补 　　　 配对与两条单链DNA结合 ? (3) ：温度上升到72 ℃左右时，在 酶的作 　　　 用下，四种脱氧核苷酸通过碱基互补配对合 　　　 成新DNA链; 1．DNA复制时为什么需要引物？ 提示：DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。 2．PCR扩增DNA过程中是否还需要解旋酶？ 提示：不需要。 3．利用PCR技术扩增1个DNA分子n次，所得DNA分子中，不含引物的脱氧核苷酸链所占的比例是多少？含引物的DNA分子所占的比例是多少？ 提示：1/2n；100%。; [跟随名师·解疑难] 1．细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR技术)的比较; 2．PCR反应过程 (1)变性：当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解聚为单链，如图：; (2)复性：系统温度下降至50 ℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，如下图：; (3)延伸：当系统温度上升至72 ℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、G、C)在DNA聚合酶的作用下，据碱基互补配对原则合成新的DNA链，如下图：; [特别提醒] PCR反应的结果 ①PCR一般要经历三十多次循环，每次循环都包括变性、复性、延伸三步。 ②两引物之间的固定长度的DNA序列呈指数扩增。;; ：将微量离心管放在离心机上，离心约10 s。目的是 使反应液集中在 ? 反应：将离心管放入 中，设置程序进行反应; [跟随名师·解疑难]; 2．结果分析与评价 DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰，可以利用DNA的这一特点进行DNA含量的测量，以判断DNA片段的扩增是否成功。具体方法如下： (1)稀释：取2 μL PCR反应液，加入98 μL蒸馏水，即将样品进行50倍稀释。 (2)对照调零：以蒸馏水作为空白对照，在波长260 nm处，将紫外分光光度计的读数调节至零。 (3)测定：取DNA稀释液100 μL至比色杯中，测定260 nm处的光吸收值。; (4)计算：检测DNA片段的扩增情况，可以通过计算DNA含量来评价扩增的效果，计算公式为： DNA含量(μg