唾液淀粉酶生化实验.docx

PAGE \* MERGEFORMAT6 唾液淀粉酶最适pH值的测定实验 小组成员: 孙天纬 李敏媛 唐芳娇 蒋雅莉 实验目的： 掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。 掌握唾液淀粉酶最适pH的测定原理和方法。 熟悉影响酶促反应速度的因素。 实验原理： 1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、pH、激活剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉反应的颜色随产物的量的增加而加深的特点，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。 2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，经查阅文献，吸收波长位于660nm处。不同pH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解pH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其pH即为唾液淀粉酶的最适pH。 实验步骤： 1.缓冲溶液的配制。取7支试管进行编号1-7，分别按下表加入试剂，再加蒸馏水稀释到10mL。 编号123456789pH6.06.26.46.66.87.07.27.47.60.2mol/L Na2HPO4(ml)0.620.931.331.882.453.053.604.054.350.2mol/L NaH2PO4(ml)4.384.073.673.122.551.951.400.950.65 2.淀粉用量的确定 用量：mL 12345空白pH 7.0缓冲液0.90.90.90.90.90.92.5g/L的淀粉0.10.20.30.40.5——稀释10倍的唾液0.10.10.10.10.10.137℃水浴7.5分钟，然后每管滴加2滴碘液H2O 5.9 5.8 5.7 5.6 5.56.0结论：加入0.2mL 2.5g/L的淀粉溶液的试管颜色最浅*选择颜色最浅的一支试管 3.唾液的采集。 先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉, 让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，并做咀嚼运动，这时，备取者的唾液会不停地流出来。 4.唾液的稀释。取7支试管，进行编号1＇-7＇,进行稀释。 稀释倍数051015202530唾液体积（ml）0.50.20.10.10.10.10.1蒸馏水（ml）00.80.91.41.92.42.9 5.唾液稀释倍数的选取。 另取7支试管，分别编上A-G号，各取上述稀释的唾液各0.1ml，分别加入相应编号的试管里，向7支试管内同时加入0.1ml的2.5g/L的淀粉溶液和0.9mL的7.0pH缓冲液，振荡混匀后放入37 ℃恒温水浴7.5分钟后取出，滴加2碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。 结论：使用稀释10倍的唾液的试管的颜色适中。 6.最适pH的测定。 另取9支试管,进行编号,按下表加入试剂。进行测定。 编号1234567892.5g/L淀粉溶液(ml)0.20.20.20.20.20.20.20.20.23ml缓冲溶液pH6.06.26.46.66.87.07.27.47.6稀释唾液 (ml)0.10.10.10.10.10.10.10.10.137℃水浴7.5分钟,取出,分别加入2滴碘液,以蒸馏水作为对照管,用660nm波长测定吸光度 A660 7.结果分析 当在最适pH下反应时,淀粉被水解最完全,剩余最少,颜色最浅,吸光度最小,所以吸光度最小对应的pH为最适pH。 思考讨论: 1. 2. 参考文献 1.吴耀生主编.医学生物化学与分子生物学实验指南.北京：人民卫生出版社.2014