鳡鱼ISSR-PCR反应体系的正交优化.pdfVIP

第 ??卷 第 ??期? 水? 产? 科? 学? ???．?????．??? ????年 ??月? ???? ?? ???? ???????? ? ??． ????? 鳃鱼 ????—???反 应体 系 的正 交优 化? 温树红 ，马云霞 ，杨 太有 ，周真真? ?河南 师范 大学 生命 科 学学 院 ，河 南 新 乡 ???????? 摘? 要 ：利 用 正 交 试 验 设 计 的 方 法 ，对 鲍 鱼 ????—???反 应 体 系 中 的 ??? 浓 度 、引 物 浓 度 、?????浓? 度 、??? 模 板 浓 度 及 ?????? 聚合 酶 浓 度 进 行 优 化 分 析 。建 立 了 最佳 ???????? 反 应 体 系 ，即 ??? 反 应 体 系 中含 ??? ??????／?、引 物 ?．??????／?、???????．??????／?、模 板 ??????????、??????? 聚? 合 酶 ?．???。并 在 此 基础 上对 退 火 温 度 和 循 环 次 数 进 行 梯 度 试 验 ，得 到 最 佳 退 火 温 度 为 ??℃ ，最 佳 循? 环 次 数 ??次 。? 关 键 词 ：鳃 鱼 ；????；正 交 设 计? 中 图分 类 号 ：????? 文 献 标 识码 ：?? 文章 编 号 ：????—????????????—????—??? 鳃 鱼 ???????????????????? ?属鲤 科 、雅 罗鱼? 和丹江 口市 凉水 河 网 箱 点 ，各 ??尾 。在 采样 点 取? 亚科 、缴 属 ，是 凶猛 的 中上层 鱼类 ，孵 化后 不 久 即 开? 背部肌 肉 ，放人 液氮 罐 中运 回实 验室 ，一 ??℃保 存? 始 捕食其 他 鱼 类 ，为 中大 型 食 肉性 鱼类 ，故 被视 为? 备 用 。? 养 鱼业 的 “敌 害 ”而 被 清 除『??。 目前 野 生 鳃 鱼 已不? ?．? 试 剂? 常见 。但鲢 鱼生 长??? 、个体 大 、肉味鲜 美 ，被视 为 高? 试 验 所 用 ??????? 聚 合 酶 ，?????，??????? 档 淡水 鱼类 ，因而鳃 鱼养 殖业 发展 迅 猛 。野 生鳎 鱼? ????????????????????均 购 自宝 生 物 工 程 ?大 连 ?? 的过 度捕杀 和人 工养 殖条 件下 的近 亲繁殖 ，造 成 了? 有 限公 司 ，???? 引 物 由上 海 生工 生 物工 程 技 术 服? 鳃 鱼遗 传 多样性 的降低 ，加 之 近几 年栖 息 环境 的恶? 务有 限公 司合 成 。? 化 ，已使其 自然 资 源 急 剧 下 降 。 因此 ，开 展 鳃 鱼 遗? ?．?? 基 因组 ??? 的提取 及检 测? 传 多样性 研究 ，对其 资源 的保 护 与利 用具 有 重要 的? 取 ?????鳎 鱼 背 部 肌 肉 ，研磨 成 糊 状 ，参 考 马? 实 际意义 。? 洪雨 等??改进 的酚一 氯 仿法 提 取 鱼类 基 因组 ，获 得? 简单 序 列 重 复 区 间 ??????—??????????????????—? 鳃 鱼基 因组