油脂下脚料中残油微生物降解初步研究.pdfVIP

氨基酸和生物资源 2012，34(1)：62～65 Am 0 Ac B 0￡ c R s0 rc s 油脂下脚料中残油微生物降解初步研究 罗跃中 ，贺召平 ，兰立新 ，吴永尧 (1．湖南化工职业技术学院 应用化学系，湖南 株洲 412004； 2．湖南农业大学 生物科学技术学院，湖南 长沙 410128) 摘要：以油脂降解菌Bacillus sp DE一8为出发菌，对油脂下脚料中的残油生物降解条件进行初步研究。结果表明：该菌对 油脂下脚料降解条件为：起始 pH值为 8，接种量 4 、摇床转速为 150r·min 、温度为 32℃、发酵 72 h，该菌株对菜籽饼的降 解率可达 78．8 。 关键词：油脂下脚料；微生物降解；发酵条件；降解率 中图分类号 ：Q 936 文献标 识码 ：A 文章编号：1006—8376(2012)01—0062—04 我国每年油脂下脚料总量在千万吨以上 ，长期 以来没有得以充分利用，油脂下脚料主要包括菜籽、 大豆及茶籽等经过取油后的副产物。其主要成份是 油脂、水分及 少量的蛋 白质、纤维 素、微量金属 等l_】 ]。油脂下脚料当用于有机肥料使用时，将改 善土壤结构和质量，有利于农作物的生长l3j。而农 村小型压榨机或液压法生产出的土榨饼，由于含壳 量大，脱油率很低，饼中脂肪含量高，影响其作为有 机肥的使用。目前，国内仅有少数油厂对各类油脂 下脚料进行了有效的综合利用，大多数油厂没有对 下脚料很好利用。这不仅造成资源的浪费，而且极 易酸败发臭的油脂下脚料对环境造成污染_4]。因此 通过对各类油脂下脚料中残油进行生物降解，不仅 可以提高油脂生产效益，更可以有效解决其所带的 环境污染问题。 目前，国内外对油脂下脚料中残油微生物降解 研究 尚未见报道。本文采用油脂下脚料(菜籽饼)为 发酵基质，以经过 UV和 DES复合诱变的油脂降解 优势菌株 DE一8为初始菌种，对油脂降解菌降解发 酵条件进行研究，以寻找最适合该油脂降解菌生长 环境条件。通过对其在不同下脚料发酵基质、pH、 温度、转速及接种量等因素进行详细的研究，为它们 能在实际生产应用中更好的发挥其降解效果提供理 论依据 。 1 材料与方法 1．1 实验材料 1．1．1 菌种 收稿日期：2Ol卜12一o1 作者简介：罗跃中，男(1983一)，研究生，讲师，主要从事生物化学实 验教学科研工作。 基金项 目：湖南省教育厅科学研究项目(07D031) 前期筛选得到并经过 UV 和 DES复合诱 变的 油脂降解优势菌株 DE一8，由生物化工实训室保藏 。 1．1．2 培养基 1)菌种保藏培养基(L) 酵母 膏：5 g，蛋 白胨：5 g，葡 萄糖：1．0 g， K2HPO 1．0 g，琼脂：15 g，pH值自然。 2)液体种子培养基(L) 酵母 膏：5 g，蛋 白胨 ：5 g，葡 萄 糖 ：1．0 g， K2 HPO4 1．0 g，pH值 自然 。 3)基础发酵的培养基(瓶) 10 g菜籽饼粉末 (花生籽饼 和茶油饼粕)装入 锥形瓶加蒸馏水至 100 mL。 1．1．3 实验试剂与实验仪器 实验试剂 ：石油醚 (AR)、无水 乙醇(AR)、氧化 铝(AR)、蛋白胨(BR)、牛肉浸膏(BR)、磷酸氯二钾 (AR)、葡萄糖(AR)。 实验所用仪器：调速多用振荡器(HY4)，国华 电器有限公 司、UV～2550紫外分光 光度计 ，日本 岛 津制作所、80—2型离心机 ，江苏金坛市 中大仪器厂 、 电子天平 ，梅特勒、立式压力蒸汽灭菌锅 ，上海 申安 、 生化培养箱(HPS一250)，哈尔滨市东明、全温空气摇 床(QYC一21)，上海福玛实验设备有限公司。 1．2 实验 方法 1．2．1 油脂测定 ：油脂含量的测定 采用紫外分光光度计法l5 ]． ① 待测样品预处理 移取 20 mL的样品发酵液，采用离心分离 ，以 3 000·min 离心 15 min，再准确移取 1O mL上清 液移入 100 mL分液漏斗中 ，加入 2O mL石油醚，并 反复充分振荡 5 min后溶液会静置分层，移去下面 水层，将处理好的石油醚移人 50 mL比色管里，用 氨基酸和生物资源 · 63 · 10 mL石油醚重复萃取水层，静置分层后将石油醚 层移入比色管，与前面几次萃取液混合。将比色管 用石油醚定容至 5O mL(稀释倍数根据实际情况而 定)。 ② 油脂降解率的计算公式 油脂降解率一(初始油含量一残余油含量)／初始油 含量 ×100Vo 1．2．2 油样的最大吸收峰值的测定 称取一定量的油样 ，溶于石油醚 中，定容 到 100 mL容量瓶中，分别取适量注入 10 mm石英比色皿 中，在 UV一2550分光光度计上扫描 ，确实最适吸收 波长 。 1．2．3 油脂样的标准