分子生物学6课件1.ppt

基 因 工 程 （GENETIC ENGINEERING）; 基 因 工 程 （GENETIC ENGINEERING）; ; 基因工程技术的定义;克隆（clone）;细胞克隆（cell clone）;个体克隆（Organism cloning ）; 分子克隆(molecular cloning); 克隆技术的应用前景; ; ;（一）限制酶的定义; ??????????????????????????????????? 阿尔伯Wemer Arber瑞士生物学家巴塞尔Biozentrum大学1929～; 限制酶 1.防御外源性DNA入侵。 2.构成细菌种属和菌株之间交叉繁殖屏障，但又允许外源DNA有某些遗漏，利于物种进化。 3.基因工程重要的工具酶。（350/400） 甲基化酶 1.保护自身DNA不受限制酶切割（限制）。 2.影响DNA分子构象，利于基因表达调控。 甲基化酶:DAM methylase (DNA adenine methylase) is an enzyme that adds a methyl group to the adenine of the sequence 5-GATC-3 in newly synthesized DNA dcm ?-? DNA cytosine methylase ; （三）限制酶的分类与命名; 2、限制酶命名的原则; ;（四）Ⅱ型限制酶的特性; Sau3AI EcoRI PstⅠ HgaⅠ 5 ′GATC GAATTC CTGCAG GACGC 3′ 3′ CTAG CTTAAG GACGTC CTGCG 5′ ;3、识别序列大多为二重对称： 具有回文结构（palindrom）。 Sau3AI EcoRI PstⅠ SmaⅠ 5 ′GATC GAATTC CTGCAG CCCGGG 3′ 3′ CTAG CTTAAG GACGTC GGGCCC 5′ ;4、多数限制酶的切割位点就在识别位点内，但少数限制酶的切割位点不在识别位点内，而在识别位点的旁侧。如HgaⅠ的识别位点是GACGC（5/10），切割位点在两条DNA链上分别在距识别位点5个和10个核苷酸处。 Sau3AI EcoRI PstⅠ HgaⅠ 5 ′GATC GAATTC CTGCAG GACGC 3′ 3′ CTAG CTTAAG GACGTC CTGCG 5′ ;5、有的识别序列中存在简并序列（有的核苷酸位点可以不同 ）。 简并序列： GTYRAC Y=C/T R=G/A YR=CG/CA/TG/TA ∴ HindⅡ可识别4个特定序列 ;6、限制酶的切割方式有两种：;7、限制酶的切割产生三种不同末端;; 8、同功异源酶（isoschizomers）;9、同尾（裂）酶 有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同，但切割DNA后，产生相同类型的粘性末端。;10、限制酶易失活，需注意酶活力的保存。;二、DNA连接酶;  T4 DNA连接酶（T4 DNA Ligase）; ; 1.依赖DNA的DNA聚合酶(DNA Polymera