PP2药物抑制乳腺癌细胞侵袭与增殖的论文.docVIP

　　PP2药物抑制乳腺癌细胞侵袭与增殖的论文 摘要】 目的 以pp2 [4amino5(4chlorophenyl)7(tbutyl) pyrazolo [3,4d] pyrimidine ] 药物（src激酶抑制剂）处理乳腺癌细胞，检测src激酶及ecadherin蛋白表达水平的变化, 观察pp2对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响，并探讨其可能的机制。方法 pp2处理乳腺癌细胞mdamb231, tt检测细胞的增殖能力。结果 pp2处理mdamb231细胞后, src表达水平明显降低, ecadherin表达水平升高;细胞的增殖和侵袭能力均受到明显抑制，剂量越高抑制作用越明显(p＜0.05) 。结论 pp2通过提高细胞粘附分子ecadherin的表达,从而抑制乳腺癌细胞mdamb231的增殖和侵袭能力。 【关键词】 pp2 侵袭 增殖 乳腺癌 cadherins是一个介导细胞间紧密连接的细胞膜糖蛋白家族。ecaherin是在上皮细胞膜表达的重要cadherin分子。ecadherin的胞浆区域通过细胞质蛋白catenins与细胞骨架的肌动蛋白丝相连，调控细胞形态和运动。在转基因小鼠的研究中发现ecadherin是细胞转移的抑制因子[1]， ecadherin能降低癌细胞的转移能力。. src是一种膜相关的无需受体的信号传导蛋白激酶，在各类细胞与细胞间的粘附分子接头中大量存在。在肝癌细胞中，ecaherin的异常是被src诱导的[2]。另外，在胰腺癌中，活化src的过表达导致了ecadherin表达下调，刺激细胞的增值和转移[3]。这些现象表明如果把src激酶表达抑制,就有可能使ecaherin表达上调,降低恶性肿瘤的转移。因此，本研究用pp2药物处理恶性肿瘤细胞，然后检测ecadherin表达水平变化及细胞侵袭和增殖能力变化。通过本研究寻找治疗肿瘤转移的新方法。 1 材料和方法 1.1 材料来源 （1）pp2（4amino5(4chlorophenyl)7(tbutyl) pyrazolo [3,4d] pyrimidine）购于sigma公司。（2）src激酶抗体、ecadherin、βactin抗体购于北京中杉公司。 1.2 细胞培养 mdamb231细胞购自美国典型物收藏中心（atcc），用含10％胎牛血清的dmem培养基（gibco公司产品），在5％co2、37℃、饱和湿度培养箱中培养。 1.3 in，加入相应的碱性磷酸酶标记的二抗（1∶500）；用nbt/bcip/buffer(1∶1∶50)显色系统显色。计算条带的积分吸光度（ia），采用目的条带与βactin的ia值比值表示待测样品的含量。 1.4 mtt试验检测增殖能力 将mdamb231细胞制成细胞悬液，进行细胞记数。将1×104个细胞接种于96孔板，加含10％胎牛血清dmem 200 μl，在37℃、 5％co2的培养箱中培养过夜；第二天分别加入不含pp2的dmem（对照）和含不同浓度的pp2的dmem，每组设6组复孔，培养两天，弃去培养液，1mg/ml mtt溶液加入每孔，培养4h，弃去mtt溶液，每孔加入dmso（二甲基亚砜）中止，振荡15min，于酶标仪上测定560nm波长的吸光度（a）值，计算抑制率（%）=(1－试验组a/对照组a)×100%，并绘制浓度抑制率曲线。 1.5 boyden小室体外侵袭实验检测侵袭指数 8μm孔径聚碳酸酯微孔滤膜（ispi公司）上均匀平铺一层基底膜基质胶（b.d公司）120μg/cm2，37℃放置3h，向下室各孔加入nih3t3细胞无血清培养上清，上室每孔分别加入2×105/ml的细胞悬液（不含血清），每组设6个复孔，常规培养10h；取出膜，拭去膜上层剩余细胞，甲醇固定，苏木精染色，高倍镜下计数膜背面穿膜细胞数，以穿膜细胞百分比反映细胞侵袭力。穿膜细胞百分比＝穿过基质胶覆盖微孔膜的细胞数/穿过无基质胶覆盖微孔膜的细胞数×100％。 1.6 统计学处理 应用spss11.0对试验数据进行分析，行t检验，p＜0.05差异有统计学意义。 2 结果 2.1 damb231细胞用不同浓度[无药物组（control）、1×10-5 mol/l、1×10-4 mol/l、1×10-3 mol/l]pp2处理48h后进行ol/l、1×10-4 mol/l、1×10-3 mol/l)的pp2处理后的穿膜细胞数与无药物组（control）相比，组间比较差异有统计学意义，且药物浓度越高侵袭能力越弱（p＜0.05），见图2。 图1 damb231细胞侵袭能力 2.3 mtt检测增殖抑制率 结果显示，经不同浓度[无药物组（con