共振光散射法研究脱氧核糖核酸与多胺的相互作用及精胺的测定.pdfVIP

第 34 卷 分析化学（FENXI HUAXUE） 研究简报 第 9 期 2006 年 9 月 Chinese JournaI of AnaIyticaI Chemistry 1299 ~ 1302 共振光散射法研究脱氧核糖核酸与 多胺的相互作用及精胺的测定 ， 吴秋华1 2 李正平＊1 王 春2 冯 硕2 方 正2 （1 河北大学化学与环境科学学院，保定 071002） （2 河北农业大学理学院，保定 071001） 摘 要 在一定条件下，精胺不仅能够与脱氧核糖核酸（ DNA）大沟嵌入结合，还能与 DNA 链上的碱基和磷 酸基进行链内结合和跨链结合，形成致密的环状螺旋结构，造成 DNA 的凝聚，从而使 DNA 共振光散射（RLS） 强度强烈地增强。增强的共振光散射强度与精胺的浓度呈现良好的线性关系，线性范围为 5. 0 X 10 - 7 ~ 1. 0 - 5 ；校正曲线的回归方程为 7 （ ），相关系数 ；检出限（ ） X 10 moI / L !RLS = 40. 22 + 5. 28 X 10 moI / L # = 0. 9936 3! 为 7. 4 X 10 - 8 moI / L。在测定精胺的线性范围内，其它多胺（亚精胺，腐胺）、蛋白质及常见的金属离子不干扰 测定。该方法用于测定新几内亚凤仙中的精胺，获得满意结果。 关键词 共振光散射，精胺，脱氧核糖核酸，相互作用 ! 引 言 多胺（poIyamines）是生物体内代谢过程中产生的具有重要生物活性的脂肪族含氮化合物，常见的 多胺有精胺（spermine，spm）、亚精胺（ spermidine，spd）和腐胺（ putrescine，put）等。研究表明，多胺与 DNA、RNA、蛋白质等生物大分子的合成有密切的关系，在调节生长发育、细胞增殖、提高植物抗逆性、延 缓衰老等各个方面具有重要作用［1，2］。此外尿样和血浆中多胺浓度可作为肿瘤的诊断及治疗疗效观察 的指标［3］。由于多胺在生物体中含量很低，尤其是在体液中含量甚微，因此，发展选择性好、灵敏度高 的检测多胺的简便方法一直是一个具有挑战性的课题。目前已有多种分离技术应用于多胺的分析，例 ［ ］ 如气相色谱、薄层色谱、高效液相色谱及毛细管电泳等 4 。其中高效液相色谱（HPLC）是生物体中多胺 分析最常用的方法。检测方法主要包括紫外、荧光、化学发光、电化学和质谱。由于多胺无紫外吸收，又 没有本征性荧光，本身亦无电化学活性，所以需要采用各种衍生反应，不仅延长了分析时间，而且很容易 产生干扰峰，而质谱检测由于设备昂贵应用尚不广泛。近年来，共振光散射（RLS）技术作为一种新的分 析方法，由于具有灵敏度高、操作简便的优点，逐渐受到人们的关注［5，6］。本实验利用共振光散射方法 研究了多胺与 DNA 的相互作用。由于精胺能与 DNA 的大沟嵌入结合，还可与 DNA 链上的碱基和磷酸 基进行链内或跨链结合，从而形成致密的环状螺旋结构，造成 DNA 的凝聚，由此引起强烈的共振光散 射，其强度与精胺的浓度呈现良好的线性关系，据此建立了选择性测定精胺的新方法。 # 实验部分 #. ! 仪器与试剂 F-4500 型荧光分光光度计（日本日立公司）；激发和发射狭缝宽度均为