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第 31 卷 分析化学（FENXI HUAXUE） 研究简报 第 8 期 2003 年 8 月 Chinese JournaI of AnaIyticaI Chemistry 945 ~ 949 基于血红蛋白的过氧化物酶特性测定其在血浆中游离态含量 王全林 吕功煊! （中国科学院兰州化学物理研究所羰基合成与选择氧化国家重点实验室，兰州 730000） 摘 要 基于血红蛋白（Hb）的过氧化物酶特性，研究了以铬黑 T（EBT）作为其氢供体底物时的酶动力学行为。 实验测定了 作为辣根过氧化物酶（ ）的替代物的类酶催化米氏常数和米氏速率。对 催化 氧化 Hb HRP Hb H2 02 铬黑 T 的机理作了探讨。建立了测定 Hb 的催化动力学光度法，方法的线性范围为 2 X 10 - 8 moI / L ~ 2 X 10 - 6 moI / L，检出限为 3.6 X 10 - 9 moI / L。用于血浆中游离 Hb 的测定，结果满意。 关键词 血红蛋白，类过氧化物酶，催化动力学，分光光度法 ! 引 言 血红蛋白（hemogIobine，Hb）是脊椎动物红细胞内的呼吸蛋白，它特有的传输氧的功能，使生命体得 以维 持。然 而 他 的 病 变 以 及 含 量 异 常 均 会 导 致 许 多 疾 病。 故 血 浆 游 离 血 红 蛋 白（ pIasma free hemogIobine，PFHb）测定在判断输血、溶血性疾病、急性机械、化学、免疫或放射线等引起的血管内红细 胞破坏程度，具有重要的临床价值［1］。文献报道的测定血红蛋白的方法大多局限于电分析化学领 ［ ］ ［ ］ 域 2 ~ 4 ；Zwart 等用 reversedoptics 分光光度计检测了 5 种临床相关的 Hb 的衍生物 5 。从血红蛋白的结构 看，它含有铁卟啉辅基——— 血红素，与辣根过氧化物酶（HPR）结构相似，因而它不但具备了过氧化物酶 的特性，而且还具有稳定、价廉的优点。基于此，蔡汝秀小组首先将其作为辣根过氧化物酶（HRP）的模 ［ ］ 型物进行研究 6 。作者曾以对甲基酚作为荧光底物，表面活性剂 SDS 胶束增敏催化荧光动力学法测定 ［ ］ ［ ］ 了尿液中的血红蛋白 7 。但对甲基酚具有毒性，对操作者和环境都会造成危害。Stiborova M 7 曾报道了 辣根过氧化物酶（ ）催化 氧化 的反应体系，而铬黑 （ ， ）又是 HRP H2 02 Sudan I T eriochrome bIack T EBT Sudan 的衍生物，我们设计了 的催化反应体系。研究发现，实验室普通的试剂铬黑 （ ）在 I Hb-EBT-H2 02 T EBT 的催化下，可以被 氧化分裂而褪色，并且反应过程符合 动力学规律。从而建立 Hb H2 02